ACEI和ARB抑制增殖作用對(duì)損傷腎小管上皮細(xì)胞再生修復(fù)的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:通過(guò)研究福辛普利(Val)和纈沙坦(Val)對(duì)腎小管上皮細(xì)胞損傷后再生修復(fù)的影響,探討血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素受體1型受體拮抗劑(ARB)抑制增殖作用在其誘導(dǎo)急性腎損傷中的作用及其機(jī)制。
　　方法:含5％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基體外培養(yǎng)腎近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞),建立細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型。Fos(10μmol/L)、Val(10μmol/L)及Fos聯(lián)合Val干預(yù)正常及缺氧復(fù)氧后HK-2細(xì)胞

2、48h,倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞并拍照,MTS比色法及Brud摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖,Elasa檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的濃度,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)、血管緊張素1型受體(AT1R)和血管緊張素2型受體(AT2R)mRNA的表達(dá),Westernbloting檢測(cè)ACE2、AT1R和AT2R蛋白的表達(dá);另外,AT2R拮抗劑PD123319(1μmol/L)和Val(

3、10μmol/L)干預(yù)正常及缺氧復(fù)氧后HK-2細(xì)胞48h,同上方法觀察各組細(xì)胞并拍照,檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中AngⅡ的濃度,Westernbloting檢測(cè)AT1R和AT2R蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)HK-2細(xì)胞缺氧3h,復(fù)氧24h后細(xì)胞活力下降最顯著(P<0.001),細(xì)胞毒性最大(P<0.001),AT2R表達(dá)上調(diào)(P<0.05);(2)缺氧復(fù)氧處理后,Fos和Fos聯(lián)合Val干預(yù)使細(xì)胞增殖活力下降(P<0.05)

4、,BrdU摻入率減少(P<0.05),ACEmRNA表達(dá)下調(diào)(P<0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清液中AngⅡ的濃度下降(P<0.05),且與細(xì)胞增殖活力呈顯著正相關(guān)(P<0.001);(3)缺氧復(fù)氧處理后,Val干預(yù)細(xì)胞增殖活力未被抑制(P>0.05),BrdU摻入率也無(wú)差異(P>0.05),AT1R表達(dá)下調(diào)(P<0.05);(4)缺氧復(fù)氧處理后,PD123319干預(yù)使細(xì)胞增殖活力下降(P<0.05),AT2R蛋白的表達(dá)下調(diào)(P<0.05)。