重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:體外構(gòu)建腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF載體;利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導入Hela及骨髓間充質(zhì)干細胞中;嘗試利用納米轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導入Hela及骨髓間充質(zhì)干細胞中。
　　方法:在人睪丸組織中提取RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后進行高保真PCR擴增得到腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，將其克隆入T載體和真核表達載體EGFP-N1中，通過菌落PCR、雙酶切及測序進行鑒定后，采用脂質(zhì)體和納米兩種方法分別轉(zhuǎn)入Hel

2、a和骨髓間充質(zhì)干細胞中，用熒光顯微鏡和Western blot鑒定轉(zhuǎn)染情況。
　　結(jié)果:重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF經(jīng)酶切和序列分析鑒定與預期設計一致;利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒成功導入Hela及骨髓間充質(zhì)干細胞中，并在Hela及骨髓間充質(zhì)干細胞中有效表達;嘗試利用納米轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導入Hela及骨髓間充質(zhì)干細胞中，并且轉(zhuǎn)染成功，并在Hela及骨髓間充質(zhì)干細胞中有效表達。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF

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