重組pEGFP-N1-IGF-1質(zhì)粒在體轉(zhuǎn)染骨質(zhì)疏松大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：
　　 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)是有效地促進(jìn)骨合成代謝和生長(zhǎng)的重要內(nèi)分泌生長(zhǎng)因子,其水平的下降被證實(shí)是骨質(zhì)疏松重要的發(fā)病機(jī)制之一,目前基因治療骨質(zhì)疏松等骨代謝疾病正在成為研究的發(fā)展方向,本實(shí)驗(yàn)使用質(zhì)粒重組體pEGFP-N1-IGF-1在體轉(zhuǎn)染骨質(zhì)疏松大鼠,研究提高其胰島素樣生長(zhǎng)因子-1水平的可行性及對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨質(zhì)量的影響。
　　 目的：
　　 通過本實(shí)驗(yàn)證實(shí)質(zhì)粒重組體pEGFP-N1-IG

2、F-1在體轉(zhuǎn)染骨質(zhì)疏松大鼠可以獲得胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的增高表達(dá)并對(duì)大鼠的骨質(zhì)疏松癥形成有效的控制,為應(yīng)用該重組質(zhì)粒治療骨質(zhì)疏松癥做理論準(zhǔn)備。
　　 方法：
　　 雌性SD大鼠30只,隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組、pEGFP-N1組和pEGFP-N1-IGF-1組,各10只。假手術(shù)組予以開腹后切除少量脂肪組織,pEGFP-N1組和pEGFP-N1-IGF-1組開腹后予雙側(cè)卵巢切除。術(shù)后12周造模成功,依次給予鹽水、pEGFP-

3、N1載體以及質(zhì)粒重組體pEGFP-N1-IGF-1分別復(fù)合脂質(zhì)體后經(jīng)尾靜脈流體力學(xué)注射。注射后定期行全身熒光活體成像及肝臟切片觀察轉(zhuǎn)染及表達(dá)效果,并定期測(cè)定血清胰島素樣生長(zhǎng)因子-1濃度至活體實(shí)驗(yàn)結(jié)束?；铙w測(cè)定大鼠腰4椎體的骨密度值后,處死,取大鼠L4椎體進(jìn)行椎體壓縮實(shí)驗(yàn)測(cè)定一系列骨生物力學(xué)參數(shù),評(píng)價(jià)該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨質(zhì)量的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.轉(zhuǎn)染后pEGFP-N1組和pEGFP-N1-IGF-1組大鼠

4、均可見全身大部出現(xiàn)明顯熒光表達(dá),以肝臟及尾部為著,肝臟切片鏡下觀察可見明顯熒光表達(dá)。
　　 2.轉(zhuǎn)染后3周內(nèi).pEGFP-N1-IGF-1轉(zhuǎn)染大鼠血清胰島素樣生長(zhǎng)因子-1表達(dá)水平顯著升高,6周內(nèi)顯著優(yōu)于pEGFP-N1轉(zhuǎn)染大鼠(P<0.05)。pEGFP-N1-IGF-1組骨密度、腰椎椎體骨生物力學(xué)參數(shù)均顯著優(yōu)于pEGFP-N1組(P<0.05),與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：