變形鏈球菌密度感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控細(xì)菌抗菌敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一章密度感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控浮游狀態(tài)變形鏈球菌抗菌敏感性的實(shí)驗(yàn)研究 研究目的：觀察密度感應(yīng)系統(tǒng)基因缺陷對(duì)浮游狀態(tài)變形鏈球菌的生長(zhǎng)繁殖及其對(duì)抗菌敏感性的影響。 材料和方法：采用分光光度計(jì)檢測(cè)變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株細(xì)菌懸液的吸光度，繪制生長(zhǎng)曲線。將不同濃度梯度的抗菌劑(氟化鈉、洗必泰、氨芐青霉素)作用于變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)抗菌劑作用后兩種細(xì)菌菌懸液的吸光度。 結(jié)果：生長(zhǎng)曲線顯示

2、，△comC—突變株的遲緩期比標(biāo)準(zhǔn)株延長(zhǎng)2h，而進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，兩菌株以相同的生長(zhǎng)速度擴(kuò)增，12h后兩菌株達(dá)到相同的穩(wěn)定期生長(zhǎng)狀態(tài)。酶標(biāo)儀結(jié)果顯示，氟化鈉作用濃度為0和200(μg/ml)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株的吸光度沒(méi)有差異，濃度為50，100，150(μg/ml)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)株的吸光度均高于△comC—突變株。洗必泰的濃度為0和2(μg/ml)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株的吸光度沒(méi)有差異，濃度為0.5，1，1.5(μg/ml)

3、時(shí)標(biāo)準(zhǔn)株的吸光度均顯著高于△comC—突變株。同樣，氨芐青霉素濃度為0，0.08，0.1(μg/ml)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株的吸光度沒(méi)有差異，濃度為0.02，0.04，0.06(μg/ml)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)株的吸光度均高于△comC—突變株。 結(jié)論：密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)浮游狀態(tài)變形鏈球菌的生長(zhǎng)繁殖無(wú)顯著的影響：密度感應(yīng)系統(tǒng)基因缺陷使浮游狀態(tài)變形鏈球菌抗菌敏感性提高。 第二章密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)變形鏈球菌生物膜抗菌敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究

4、 研究目的：觀察密度感應(yīng)系統(tǒng)基因缺陷對(duì)變形鏈球菌生物膜的結(jié)構(gòu)以及生物膜抗菌敏感性的影響。 材料和方法：將洗必泰作用于細(xì)菌生物膜，采用激光共聚焦顯微鏡觀察其作用前后變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株生物膜的立體結(jié)構(gòu)，厚度和活菌死菌比的差異。 結(jié)果：激光共聚焦顯微鏡觀察顯示，變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株生物膜在抗菌劑作用前結(jié)構(gòu)致密，洗必泰作用后，生物膜呈片狀脫落，但仍殘存一部分綠色熒光即活菌存在；而△comC—突變株生物膜在抗菌

5、劑作用前已表現(xiàn)出疏松呈網(wǎng)狀、未成熟的生物膜結(jié)構(gòu)，抗菌劑作用后生物膜基本脫落，幾乎都為死菌。數(shù)值結(jié)果分析顯示，抗菌劑作用前，標(biāo)準(zhǔn)株生物膜綠色熒光面積GFA和活菌死菌比高于△comC—突變株，生物膜的厚度無(wú)顯著性差異；抗菌劑作用后，標(biāo)準(zhǔn)株活菌死菌比值相比作用前下降了39％，而△comC—突變株活菌死菌比值相比作用前下降了67％，厚度仍無(wú)明顯差異。 結(jié)論：密度感應(yīng)系統(tǒng)基因缺陷影響變形鏈球菌生物膜結(jié)構(gòu)的成熟，并使細(xì)菌生物膜抗菌敏感性提高

6、。 第三章細(xì)菌素免疫蛋白在變形鏈球菌抗菌敏感性中作用的初步研究 研究目的：實(shí)時(shí)定量檢測(cè)抗菌劑作用前后變形鏈球菌細(xì)菌素免疫蛋白基因immA和immB的表達(dá)差異，探討密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)基因表達(dá)差異的影響。 材料和方法：配制最小抑菌濃度的氨芐青霉素作用于細(xì)菌，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)抗菌劑作用前后，變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和△comC—突變株細(xì)菌素免疫蛋白基因immA和immB的表達(dá)。 結(jié)果：氨芐青霉素作用前和作用后

7、，變形鏈球菌△comC—突變株中immA和immB基因的表達(dá)量均明顯低于標(biāo)準(zhǔn)株，表明密度感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控細(xì)菌素免疫蛋白基因的表達(dá)。變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株加入氨芐青霉素后，immA和immB基因表達(dá)量分別提高5.25倍和9.53倍；而△comC—突變株加入氨芐青霉素后，immB基因表達(dá)量提高4.75倍，immA基因表達(dá)沒(méi)有顯著性變化，提示抗菌劑加入后immA和immB基因的表達(dá)上調(diào)，但密度感應(yīng)缺陷會(huì)降低基因表達(dá)上調(diào)的程度。 結(jié)論：抗菌劑作用