小檗堿對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞AMPK信號(hào)通路及其下游糖脂代謝相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過比較小檗堿(BBR)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激動(dòng)劑AICAR及抑制劑CompoundC對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞(IR-HepG2Cells)葡萄糖消耗量,細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)的含量,以及細(xì)胞絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶11(LKB1),AMPK,環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白輔激活物2(TORC2)及其下游糖、脂代謝相關(guān)蛋白磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G-6-P),磷酸化乙酰輔酶A羧化酶

2、(P-ACC),乙酰輔酶A羧化酶(ACC),脂肪酸合成酶(FAS)表達(dá)的影響,從信號(hào)通路途徑探討B(tài)BR改善IR的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　HepG2細(xì)胞用含0.25mmol/L軟脂酸(PA)和0.2％牛血清白蛋白(BSA)的DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)24小時(shí)建立IR-HepG2細(xì)胞模型,給予5μmol/LBBR,10μmol/LBBR,0.5mmol/LAICAR及10μmol/LCompoundC干預(yù),并設(shè)立正常對照組,

3、用葡萄糖氧化酶法測定培養(yǎng)液中葡萄糖的消耗量,用甘油三酯檢測試劑盒測定TG含量。收集細(xì)胞并裂解提取蛋白,用WesternBlot法檢測LKB1,AMPK,TORC2,PEPCK,G-6-P,P-ACC,ACC,FAS的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　IR模型組葡萄糖的消耗量較正常對照組顯著減少(P<0.01);TG含量較正常對照組顯著增多(P<0.01);與模型組相比,5μmol/LBBR、10μmol/LBBR、AICAR組的葡

4、萄糖消耗量顯著增加(P<0.01),細(xì)胞內(nèi)TG含量顯著減少(P<0.05,P<0.01);CompoundC組葡萄糖消耗量、TG含量與IR模型組葡萄糖消耗量及TG含量無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　與正常對照組相比,模型組細(xì)胞LKB1,AMPK及P-ACC表達(dá)明顯降低(P<0.01),其下游控制糖異生的TORC2表達(dá)增加,糖異生關(guān)鍵酶PEPCK和G-6-P蛋白表達(dá)增加(P<0.05,P<0.01),AMPK下游與脂肪合成相

5、關(guān)的ACC、FAS蛋白表達(dá)增加(P<0.01)。與模型組比較,BBR組細(xì)胞LKB1,AMPK及pACC表達(dá)明顯增加(P<0.01),AMPK下游糖脂相關(guān)蛋白TORC2、PEPCK、G-6-P、ACC、FAS蛋白表達(dá)均降低(P<0.01)。AICAR及CompoundC對LKB1蛋白的表達(dá)無明顯影響(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　BBR能增加IR-HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗,減少IR-HepG2細(xì)胞內(nèi)的TG含量。提示BBR