陰道毛滴蟲(chóng)與人型支原體共生關(guān)系及其相關(guān)生物學(xué)特性的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文陰道毛滴蟲(chóng)與人型支原體共生關(guān)系及其相關(guān)生物學(xué)特性的研究姓名：肖建春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：倫照榮20060601肖建春陰道毛滴蟲(chóng)與人型支原體共生關(guān)系及“相關(guān)生物學(xué)特性的研究中山大學(xué)博士學(xué)位論2006(p=00038)及感染人型支原體(p=O033)這兩種表型與蟲(chóng)株在捌狀聚類(lèi)圖上的位置有明顯的相關(guān)性。而ITS的點(diǎn)突變與人型支原體感染和甲硝唑抗性之間沒(méi)有明顯的相關(guān)性(p005)。我們的研究結(jié)果顯示人型支原

2、體在毛滴蟲(chóng)體內(nèi)的共生顯著地影響了毛滴蟲(chóng)的RAPD圖譜(，)=0002)及其后的分子進(jìn)化分析(p=O003)。通過(guò)分析用強(qiáng)力霉素處理前后感染人型支原體的陰道毛滴蟲(chóng)的RAPD的圖譜變化，發(fā)現(xiàn)圖譜中336％的擴(kuò)增條帶是來(lái)源于人型支原體，而且人型支原體去除后，毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)株間的遺傳相似系數(shù)從70％增加到75％(j，=o003)，顯示它們有著更為密切的遺傳關(guān)系。利用蟲(chóng)株處理前后的RAPD數(shù)據(jù)構(gòu)建的6株陰道毛滴蟲(chóng)的系譜樹(shù)狀圖，顯示出不同的聚類(lèi)方式(p=

3、O003)。因此，我們認(rèn)為，使用RAPD方法分析毛滴蟲(chóng)的基因多態(tài)性時(shí)，應(yīng)首先檢測(cè)其是否感染人型支原體，以免得出錯(cuò)誤的結(jié)淪。陰道毛滴蟲(chóng)蛋白水解酶分析結(jié)果表明，水解酶的活性表現(xiàn)出強(qiáng)烈的pH依賴性，表現(xiàn)在毛滴蟲(chóng)具有強(qiáng)烈的酸性蛋白水解酶活性，但缺乏堿性蛋白水解酶活性。蟲(chóng)株堿性蛋白水解酶的缺乏可能是生物適應(yīng)環(huán)境長(zhǎng)期進(jìn)化的結(jié)果。雖然，每個(gè)蟲(chóng)株的酸性蛋白水解酶譜都比較近似，但活性有顯著差異。我們的結(jié)果提示毛滴蟲(chóng)可能通過(guò)降解特異抗體(IgG)來(lái)逃避宿主

4、對(duì)它的攻擊，其降解能力呈現(xiàn)時(shí)問(wèn)和濃度依賴性，且不同蟲(chóng)株降解lgO的能力有量的差別。率先利用MGE—PCR方法研究陰道毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)株問(wèn)的分子差異，結(jié)果顯示MGEPCR較之RAPD分析可檢測(cè)到蟲(chóng)株間更多的遺傳變異度(平均遺傳距離分別為493％和314％)，該法具有良好的穩(wěn)定性與重復(fù)性。因此，MGE可作為種內(nèi)遺傳變異的分子標(biāo)記，為毛滴蟲(chóng)診斷及進(jìn)化關(guān)系分析等提供更多的理論依據(jù)。通過(guò)分析流行中國(guó)(廣州)的陰道毛滴蟲(chóng)蟲(chóng)株的核糖體基因序列(ITS、28S

5、rRNA)，進(jìn)一步確證它們的高度保守性，同時(shí)表明了雖然毛滴蟲(chóng)是一種古老的真核生物，但可能是最近才開(kāi)始出現(xiàn)分歧。本論文首次發(fā)現(xiàn)陰道毛滴蟲(chóng)感染人型支原體與其甲硝唑抗藥性之問(wèn)存在相關(guān)性，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)陰道毛滴蟲(chóng)流行病學(xué)及其相關(guān)的基礎(chǔ)研究具有重要的指導(dǎo)意義。通過(guò)深入研究人型支原體在陰道毛滴蟲(chóng)體內(nèi)的共生對(duì)毛滴蟲(chóng)分子進(jìn)化的影響，表明共生的人型支原體顯著地改變了毛滴蟲(chóng)的分子圖譜分析的結(jié)果，指出使用RAPD方法分析毛滴蟲(chóng)的基因多態(tài)性時(shí)，有必要檢測(cè)其是否感染