鼻咽癌中β-catenin的表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲的關(guān)系.pdf

1、背景：
　　 鼻咽癌是我國(guó)南方最常見的惡性腫瘤之一，素有“廣東瘤”之稱。據(jù)世界衛(wèi)生組織的粗略估計(jì)，全球80％左右的鼻咽癌發(fā)生在我國(guó)。鼻咽癌的病因及其發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全明了，但可以肯定地說，鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展與遺傳、環(huán)境和Epstein-Barr(EB)病毒感染等多因素有關(guān)。連環(huán)蛋白(catenin)與鈣粘蛋白(cadherin)是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間粘附的重要分子，catenin包括α、β、γ三種。β-catenin同時(shí)也是Wn

2、t信號(hào)通路的重要成員。Wnt信號(hào)通路在調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育、分化中具有重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)人類許多腫瘤如結(jié)直腸癌、肺癌和乳腺癌細(xì)胞和組織中出現(xiàn)Wnt信號(hào)通路的異常激活。我們前期研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織中EB病毒編碼的重要癌基因——潛伏膜蛋白1(latent membrane protein1，LMP1)與β-catenin的異常表達(dá)存在明顯的正相關(guān)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)LMP1可提高鼻咽癌細(xì)胞株β-catenin的核聚集及上調(diào)β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性，且

3、這種改變與鼻咽癌細(xì)胞株不同分化程度有關(guān)。由此，LMP1除了通過NF-κB、AP-1和STAT信號(hào)通路外，還可能通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起作用。但β-catenin究竟在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中起何作用?β-catenin的表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲等生物學(xué)行為關(guān)系如何?β-catenin能否成為鼻咽癌治療的新靶點(diǎn)?研究這些問題對(duì)理解鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制和臨床針對(duì)鼻咽癌的治療具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。<

4、br>　　 目的：
　　 探討鼻咽癌組織中β-catenin的表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲等生物學(xué)行為的關(guān)系，以期為鼻咽癌的基因治療找到新的靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 1.Western blot檢測(cè)并比較不同分化程度的鼻咽癌細(xì)胞株CNE1(高分化)和CNE2(低分化)中β-catenin、caspase3、PARP、MMP2、MMP9、c-Myc、cyclin D1蛋白的表達(dá)；
　　 2.West

5、ern blot檢測(cè)鼻咽新鮮組織(包括1例鼻咽粘膜慢性炎與5例鼻咽癌)中β-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表達(dá)情況；
　　 3.免疫組化檢測(cè)78例鼻咽癌組織中β-catenin、細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki-67和細(xì)胞凋亡指標(biāo)caspase3的表達(dá)并探討β-catenin表達(dá)與增殖、凋亡指標(biāo)的相關(guān)性；
　　 4.采用Lipofectamine2000將β-catenin SiRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至不同分化程度的鼻咽癌細(xì)胞株CNE

6、1和CNE2，Western blot檢測(cè)β-catenin表達(dá)下調(diào)后不同時(shí)間鼻咽癌細(xì)胞MMP2、MMP9、Cyclin D1、c-Myc的表達(dá)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.Western-blot檢測(cè)不同分化程度鼻咽癌細(xì)胞株CNE1和CNE2中β-catenin的表達(dá)，結(jié)果顯示CNE1和CNE2的β-catenin蛋白表達(dá)水平無明顯差異。另外，MMP2、MMP9、c-Myc

7、及cyclin D1蛋白表達(dá)水平在高分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE1低于低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2。而細(xì)胞凋亡指標(biāo)caspase3和PARP的蛋白表達(dá)水平在高分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE1高于低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2。
　　 2.Western-blot檢測(cè)鼻咽癌(5例)和鼻咽粘膜慢性炎(1例)新鮮組織中β-catenin、MMP2和MMP9的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示5例鼻咽癌新鮮組織中均有β-catenin表達(dá)，且其中3例β-catenin呈明

8、顯高表達(dá)；MMP-2在4例鼻咽癌新鮮組織中有表達(dá)，且表達(dá)量不一致；MMP-9在5例鼻咽癌新鮮組織中均有明顯表達(dá)；而鼻咽粘膜慢性炎新鮮組織(1例)中均未檢測(cè)到β-catenin、MMP2和MMP9的表達(dá)。
　　 3.免疫組化結(jié)果顯示β-catenin在鼻咽癌組織中異常表達(dá)(陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞膜＜70％或＞10％出現(xiàn)細(xì)胞漿或/和細(xì)胞核著色)率占76.9％(60/78)；caspase3陽(yáng)性表達(dá)率為30.8％(24/78)；Ki-67

9、的陽(yáng)性表達(dá)率范圍為1％～64％，其中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率大于20％為38例(38/78)。β-atenin的異常表達(dá)與caspase3表達(dá)存在明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.637，P＜0.05)；在Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率＞20％的組織中β-catenin與Ki-67的表達(dá)率呈明顯正相關(guān)(r=0.714，P＜0.05)。
　　 4.將β-catenin SiRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)不同分化程度的鼻咽癌細(xì)胞株CNE1和CNE2，與對(duì)照組比較，β-ca

10、tenin SiRNA轉(zhuǎn)染組β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯降低。其下游基因cyclinD1和c-Myc表達(dá)亦明顯降低，且呈時(shí)間依賴性；另外，細(xì)胞侵襲指標(biāo)MMP2和MMP9的蛋白表達(dá)在β-catenin SiRNA轉(zhuǎn)染組也明顯下降，并呈時(shí)間依賴性。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示與對(duì)照組比較，β-catenin SiRNA轉(zhuǎn)染組鼻咽癌細(xì)胞增殖明顯減低。流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示β-catenin SiRNA轉(zhuǎn)染組鼻咽癌細(xì)胞凋亡亦明顯增加，且呈時(shí)間依賴性。

11、
　　 結(jié)論：
　　 1.鼻咽癌組織中存在β-catenin的異常表達(dá)且與高增殖指數(shù)呈正相關(guān)，與凋亡指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)；與鼻咽粘膜慢性炎比較，鼻咽癌組織中存在β-catenin、MMP2和MMP9蛋白的高表達(dá)，可能與癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為有關(guān)；
　　 2.低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的cyclinD1、c-Myc、MMP2和MMP9表達(dá)高于高分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE1，而caspase3、PARP表達(dá)低于CNE1，說明不同