ROCK-ERK1-2通路對(duì)AD大鼠海馬神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)功能的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)采用腦室注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)制作阿爾茨海默病大鼠模型，觀察其認(rèn)知行為學(xué)、海馬突觸結(jié)構(gòu)及界面參數(shù)、ERK活性的表達(dá)變化以及鹽酸法舒地爾干預(yù)后對(duì)它們的影響，探討ROCK-ERK1/2通路對(duì)AD大鼠海馬神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)功能的影響及其機(jī)制，為尋找治療AD的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.動(dòng)物分組及處理:采用36只清潔級(jí)健康雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，鼠齡3～4月，體

2、重250～300g，隨機(jī)分為模型組、對(duì)照組和法舒地爾干預(yù)組，每組12只。在實(shí)驗(yàn)的第1天和第3天行側(cè)腦室注射，模型組及法舒地爾干預(yù)組每只大鼠每側(cè)側(cè)腦室穿刺注射鏈脲佐菌素(STZ)1.5mg/kg，而對(duì)照組行側(cè)腦室注射等量緩沖液;術(shù)后法舒地爾干預(yù)組每日腹腔注射法舒地爾10mg/kg，對(duì)照組和模型組每日腹腔注射等量生理鹽水，腹腔注藥連續(xù)4周。
　　 2.動(dòng)物行為學(xué)觀察:4周后對(duì)大鼠進(jìn)行為期6d的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，用Morris水

3、迷宮檢測(cè)大鼠的上臺(tái)潛伏期、游泳速度、靶象限游泳時(shí)間百分比、穿越平臺(tái)次數(shù)及搜索策略。
　　 3.各組受試動(dòng)物于水迷宮實(shí)驗(yàn)后隨機(jī)取6只立即快速斷頭處死，取大鼠海馬組織，超低溫保存;余下6只行灌注固定。
　　 4.電鏡下觀察大鼠海馬CA1區(qū)突觸結(jié)構(gòu)，采用Westernblot測(cè)定ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠行為學(xué)變化:與對(duì)照組及干預(yù)組相比，模型組大鼠平均上臺(tái)潛伏期

4、明顯延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少，靶象限游泳時(shí)間百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);干預(yù)組與對(duì)照組比較上述參數(shù)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;三組間平均游泳速度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 2.電鏡下突觸改變:與對(duì)照組相比，模型組突觸前線粒體嵴模糊、腫脹，海馬CA1區(qū)突觸計(jì)數(shù)顯著減少，突觸間隙寬度顯著增大，PSD厚度顯著變薄，突觸活性區(qū)長(zhǎng)度變短，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;而干預(yù)組大鼠較模

5、型組大鼠海馬CA1區(qū)突觸計(jì)數(shù)增加，突觸間隙寬度減小、PSD厚度增加、突觸活性區(qū)長(zhǎng)度變長(zhǎng)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);干預(yù)組與對(duì)照組比較上述參數(shù)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 3.模型組海馬ERK1/2的活性較干預(yù)組和對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);干預(yù)組與對(duì)照組比較ERK1/2的活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.雙側(cè)腦室注射STZ可致大鼠認(rèn)知功能