胰腺癌組織中ABCG2、MRP-1的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　 原發(fā)性胰腺癌約占全身惡性腫瘤的1％-2％。近年來,胰腺癌的發(fā)病率逐年上升。于此同時(shí),盡管在胰腺癌的影像診斷、腫瘤標(biāo)志物、治療方法等諸多領(lǐng)域已有突出進(jìn)展,但胰腺癌預(yù)后仍不樂觀。術(shù)后療效不佳主要?dú)w因于:術(shù)后1-2年內(nèi)的局部復(fù)發(fā)、腫瘤肝轉(zhuǎn)移或二者并發(fā)。輔助治療有助于提高遠(yuǎn)期生存率,尤其對(duì)于因腫物浸潤腹膜后隙及腸系膜上動(dòng)脈的患者,化療仍可作為可選擇的治療手段。到目前為止,種類繁多的化療方案仍沒有將患病生存期的有效改觀,

2、最長中位生存時(shí)間在4-9個(gè)月之間,而且有效率較低。因此,和其他種類的胃腸道惡性腫瘤比較,胰腺癌是最具化療抗藥性的腫瘤之一。為了開發(fā)出對(duì)胰腺癌治療更加有效的藥物,對(duì)于胰腺癌耐藥機(jī)制的研究已經(jīng)非常急迫?，F(xiàn)有研究結(jié)果表明:在人類腫瘤細(xì)胞中,參與MDR(mutidrtlg resistance,多重耐藥)的主要是ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族。其成員主要包括:ABCB家族(包括MDR1即P糖蛋白)、ABCC家族(包括MRP-1~MRP-9蛋白)以及新近發(fā)現(xiàn)

3、的ABCG家族(包括ABCG2蛋白等)。其中ABCB家族蛋白發(fā)現(xiàn)較早、論述較多,而對(duì)ABCC和ABCG蛋白家族在胰腺癌領(lǐng)域的研究卻十分有限,而且存在部分結(jié)果相互矛盾,本實(shí)驗(yàn)將對(duì)“胰腺癌組織中ABCG2、MRP-1的表達(dá)及臨床意義”作進(jìn)一步研究分析。以為臨床用藥個(gè)體化、抗癌藥物選擇、及特異性MDR抑制劑因子類藥物的使用提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 本試驗(yàn)所用標(biāo)本均來自中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院普外科2003年至2

4、009年間手術(shù)切除的胰腺腫瘤轉(zhuǎn)移灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和外傷及十二指腸癌手術(shù)切除的胰腺組織標(biāo)本。所有標(biāo)本均有詳細(xì)臨床資料,均為初發(fā)病例,手術(shù)前未接受放療、化療等抗腫瘤治療。胰腺腫瘤組共80例,年齡范圍50-70歲,平均55歲；高分化26例中分化20例低分化23例良性11例。外傷組織和十二指腸癌手術(shù)切除的胰腺18例作為正常對(duì)照組,年齡范圍為50-70歲。所有標(biāo)本經(jīng)10％中性福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋,4 um厚切片編號(hào)備用,連續(xù)切片2張,兩張分

5、別行ABCG2、MRP-1免疫組化染色。操作嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行,光鏡觀察、照相、計(jì)數(shù)十個(gè)高倍鏡視野下的陽性染色細(xì)胞。計(jì)算陽性細(xì)胞率和平均陽性細(xì)胞數(shù),描述ABCG2/MRP-1陽性細(xì)胞在癌組織中分布情況。
　　 由兩名病理科醫(yī)師在不知病例臨床資料的情況下獨(dú)立閱片,結(jié)果不一致時(shí),采取協(xié)商統(tǒng)一原則。將腫瘤分化程度分三級(jí)加良性。ABCG2、MRP-1均為跨膜蛋白,陽性表現(xiàn)為胞膜染成高出背景色的棕黃色。完成染色后于400x光鏡下讀片,評(píng)

6、估ABCG2及MRP-1的陽性細(xì)胞在癌組織中分布情況,有無分布規(guī)律特點(diǎn)。
　　 多個(gè)病理級(jí)別之間的陽性細(xì)胞率比較采用x2檢驗(yàn),均數(shù)的多重比較采用q檢驗(yàn),兩均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),采用spearman法進(jìn)行組間相關(guān)分析。所有結(jié)果均在SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包中實(shí)現(xiàn)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1、ABCG2、MRP-1蛋白在胰腺癌、良性胰腺腫瘤和正常胰腺組織中的表達(dá)
　　 ABCG2蛋白的陽性表達(dá)特征為在細(xì)胞膜或

7、胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒,極少數(shù)出現(xiàn)明顯的粗大粒狀。其在胰腺癌中的表達(dá)不均勻并有較明顯的異質(zhì)性,可成劇照或分散分布,在胰腺癌細(xì)胞中其陽性率為53.62％(37/69),而在正常胰腺組織中其陽性率僅為16.67％(3/18),且為局灶分布,兩者比較差異顯著(P=0.005),比較胰腺癌和胰腺良性腫物的ABCG2陽性表達(dá)率,發(fā)現(xiàn)在良性腫物(切片病理證實(shí)全部為胰腺實(shí)性乳頭狀瘤)其陽性率為18.18％(2/11),同樣具有統(tǒng)計(jì)意義(P=0.0289

8、)；根據(jù)腫瘤大小,以直徑2cm為標(biāo)準(zhǔn)將胰腺癌標(biāo)本分成兩組,在腫瘤大于2cm組中ABCG2的陽性率為60.78％(31/51),而小于2cm組為33.33％,提示該蛋白與腫塊大小相關(guān)(P:0.045)。而對(duì)其他因素的相關(guān)分析中發(fā)現(xiàn),其與腫瘤病理分期(高中低分化)、臨床UICC分期和是否有淋巴結(jié)無關(guān)。MRP-1蛋白位于癌細(xì)胞的胞漿和胞膜上,呈均勻已知的棕黃色小顆粒。在胰腺癌細(xì)胞中其陽性率為62.32％(43/69),而在正常胰腺組織中其陽性

9、率僅為27.78％(5/18),兩者比較差異顯著(P=0.009)；比較胰腺癌和胰腺良性腫物的ABCG2陽性表達(dá)率,發(fā)現(xiàn)在良性腫物(切片病理證實(shí)全部為胰腺實(shí)性乳頭狀瘤)其陽性率為18.18％(2/11),同樣具有統(tǒng)計(jì)意義(P=0.006):根據(jù)腫瘤大小,以直徑2cm為標(biāo)準(zhǔn)將胰腺癌標(biāo)本分成兩組,在腫瘤大于2cm組中ABCG2的陽性率為70.59％(36/51),而小于2cm組為38.89％,提示該蛋白與腫塊大小相關(guān)(P=0.017)；在按

10、病理分期將標(biāo)本分成高中分化和低分化兩組后,其陽性率分別為71.74％和43.48％,提示MRP-1蛋白在不同分期腫瘤腫瘤中表達(dá)具有差異(P=0.022)；而對(duì)其他因素的相關(guān)分析中發(fā)現(xiàn),其與臨床UICC分期和是否有淋巴結(jié)無關(guān)。
　　 2、ABCG2、MRP-1表達(dá)的相關(guān)性及其意義
　　 將實(shí)驗(yàn)中69例胰腺癌標(biāo)本按ABCG2蛋白表達(dá)情況分為兩組,看MRP-1蛋白的表達(dá)是否具有差異。69例胰腺癌標(biāo)本中,.ABCG2陽性者37例

11、,其中MRP-1陽性28例,陽性率75.68％；ABCG2陰性者32例,其中MRP-1陽性15例,陽性率46.86％,其表達(dá)具有差異(P=0.013)。經(jīng)spearman秩合分析,提示MRP-1和ABCG2表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.489,P=0.044)。
　　 本研究提示:
　　 1.在人類病理標(biāo)本中,ABCG2在胰腺癌、正常胰腺和胰腺腫瘤中表達(dá)具有差異,這一點(diǎn)提示ABCG2參與了胰腺癌的MDR的發(fā)生。
　　

12、2.ABCG2蛋白與腫塊大小相關(guān)(P=0.045),此結(jié)果可能提示ABCG2對(duì)胰腺癌預(yù)后不良具有提示意義。
　　 3.ABCG2和MRP-1蛋白表達(dá)明顯相關(guān)。
　　 4.初步補(bǔ)充和驗(yàn)證兩種蛋白的SP實(shí)驗(yàn)中表達(dá)特點(diǎn):本實(shí)驗(yàn)對(duì)于ABCG2在胰腺癌病理標(biāo)本中表達(dá)特征描述為“在細(xì)胞膜或胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒,極少數(shù)出現(xiàn)明顯的粗大粒狀。不均勻并有較明顯的異質(zhì)性,可成局灶或分散分布”；MRP-1的表達(dá)特點(diǎn)為“位于癌細(xì)胞的胞漿和胞膜上,