不同沖洗液對海水浸泡軟組織傷影響的實驗研究.pdf

1、開放性損傷是一個復(fù)雜的病理變化過程，不論平時或戰(zhàn)時都較多見。因傷口多有污染，如處理不及時或不當(dāng)，易發(fā)生感染，影響愈合和肢體的功能恢復(fù)，嚴(yán)重者可造成殘廢甚至危及傷員的生命。過去的研究多集中在開放性損傷本身，而對影響損傷進(jìn)程的環(huán)境因素涉及較少。海洋生態(tài)環(huán)境與陸地生態(tài)系統(tǒng)有著本質(zhì)的區(qū)別，發(fā)生在海水中的開放性損傷是指漁民或海戰(zhàn)中傷員受海水浸泡的一類特殊損傷，該類傷員的救治是目前我們醫(yī)務(wù)人員面臨的重要課題。目前國內(nèi)外對合并海水浸泡的開放性損傷的傷

2、情特點、發(fā)病機制及臨床救治均極少見文獻(xiàn)報道。本研究旨在通過海水浸泡軟組織傷的動物模型，在海水浸泡結(jié)束后立即應(yīng)用不同濃度的低滲鹽水對傷口進(jìn)行沖洗干預(yù)，電鏡下觀察肌細(xì)胞、肌間質(zhì)損傷變化及細(xì)胞凋亡情況，研究海水及低滲鹽水的干預(yù)對開放性傷口的影響，以及對組織可能帶來的病理改變及對檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase3基因mRNA表達(dá)的影響，了解組織Na+，K+-ATPase活性的變化，初步確定低滲鹽水沖洗在該類創(chuàng)傷早期清創(chuàng)中的重要性，為臨床外科早

3、期清創(chuàng)治療提供理論依據(jù)。 目的：建立海水浸泡兔軟組織傷的動物模型，觀察不同濃度低滲鹽水沖洗后海水浸泡軟組織傷的病理變化及細(xì)胞凋亡，并對其機制作進(jìn)一步探討，為臨床收治大量海水浸泡軟組織傷的初步處理提供依據(jù)。 方法：將新西蘭大白兔60只隨機分為生理鹽水沖洗組(A組)、無菌蒸餾水沖洗組(B組)、0.45％低滲鹽水沖洗組(C組)、單純海水浸泡組(D組)各15只。利用兔后腿軟組織損傷、海水浸泡模型，分別于損傷后浸泡于海水中2小時，

4、浸泡后分別進(jìn)行各種低滲鹽水沖洗，分別于干預(yù)處理后1h、3h、6h、8h、12h，在損傷周圍0.5cm范圍內(nèi)的肌肉組織中取材，0.5cm3損傷組織用4％福爾馬林固定，HE染色，光鏡下觀察損傷組織的細(xì)胞浸潤情況，用免疫組化法檢測受傷肌肉組織凋亡相關(guān)基因Caspase3表達(dá)情況；1 mm3損傷組織用1％戊二醛-％多聚甲醛混合固定液(pH7.4)4℃固定，電鏡觀察其細(xì)胞凋亡及細(xì)胞膜、線粒體等結(jié)構(gòu)的變化；生化檢測Na+，K+-ATPase活性，了

5、解其組間的差別。 結(jié)果：1、切取標(biāo)本時損傷區(qū)域的大體觀察：A組(生理鹽水沖洗組)動物除出現(xiàn)肌肉組織水腫，表現(xiàn)為表面瘀血、淺表靜脈擴張，可見到輕度糜爛、出血點；B組(無菌蒸餾水沖洗組)以肌肉組織水腫為主，微血管擴張、滲血明顯，極少見創(chuàng)面壞死糜爛；C組(0.45％低滲鹽水沖沈組)由于所用的沖洗液的濃度介于前兩組之間，創(chuàng)面兼有肌肉組織水腫、壞死糜爛，且都占較大比重：D組(單純海水浸泡組)肌肉組織可見到明顯腫脹，充血、滲出、出血、糜爛最

6、重，其中6h是明顯損傷加重，12h時最為嚴(yán)重。2、光鏡及電鏡下的病理改變：A組(生理鹽水沖洗組)、B組(蒸餾水沖洗組)動物軟組織HE染色在顯微鏡下肌肉組織結(jié)構(gòu)分層較清晰，肌肉纖維紋理清楚，結(jié)構(gòu)保持比較完整，各部肌細(xì)胞形態(tài)正常。C組(0.45％低滲鹽水沖洗組)和D組(單純海水浸泡組)所有動物損傷軟組織切片均能觀察到損傷部位肌肉、軟組織的變性，表現(xiàn)為散在的斑片狀的空泡樣的變性，肌紋理扭曲不規(guī)則，及大量的白細(xì)胞浸潤，散在的紅細(xì)胞。傷后1小時，

7、各組之間病理改變差別不明顯。傷后3h的病理特征為出現(xiàn)不同程度的水腫改變。在6h，8h，12h組，D組肌肉纖維腫脹更加顯著。HE染色顯示的各組之間病理改變比較，動物海水浸泡傷的肌組織水腫的高峰時間和嚴(yán)重程度均有差別，B組(蒸餾水沖洗組)肌肉組織水腫、壞死高峰時間出現(xiàn)在傷后8h，傷后12h的組織水腫程度與8h的觀察相差無幾；但是在D組(單純海水浸泡組)，肌肉組織變性壞死高峰時間出現(xiàn)在傷后6h，且隨時間延長水腫持續(xù)加重，12h組所觀察到的組織

8、水腫程度明顯要重于6h組，也比A組內(nèi)任意時間組的水腫程度都要嚴(yán)重的多，且兩組之間差異明顯。3、Caspase3基因mRNA水平的表達(dá)：A組(生理鹽水沖洗組)、正常組光鏡觀察均無明顯改變。B(蒸餾水沖洗組)、C組(0.45％低滲鹽水沖洗組)和D組(單純海水浸泡組)觀察各分析時相點肌肉、組織主要顯示為斑片狀分布的壞死組織，可見散在分布的凋亡肌細(xì)胞，且有大量的白細(xì)胞、白細(xì)胞浸潤。在傷后1h，各組之間創(chuàng)傷病理改變差別不明顯，隨著時間推移肌細(xì)胞凋

9、亡更加顯著，且各組之間差異明顯。隨著觀察時間的延長，A，B、C、D各組Caspase3陽性神經(jīng)細(xì)胞0D值均呈現(xiàn)增加趨勢。組間比較，D組(海水浸泡傷組)Caspase3陽性表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞0D值在各時間組均高于其余各組。統(tǒng)計學(xué)分析各組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4、Na+，K+-ATPase活性的檢測：A(生理鹽水沖洗組)組，Na+，K+-ATPase活性先下降后逐漸上升至基本正常，其余各組活性變化趨勢基本一致，其中蒸餾水沖洗組

10、(B組)較生理鹽水沖洗組(A組)偏低，0.45％低滲鹽水沖洗組(C組)次之，單純海水浸泡組(D組)活性最低。各觀察時間段，生理鹽水沖洗組(A組)一直處于最高水平。 結(jié)論：1、海水浸泡開放性傷口在治療早期用生理鹽水沖洗，與無菌蒸餾水、0.45％低滲鹽水沖洗相比，從大體觀察、病理、生化各方面相比明顯優(yōu)于后兩組；2、海水浸泡開放性傷口早期救治，積極使用生理鹽水沖洗，對傷口進(jìn)行徹底清創(chuàng)，使受傷區(qū)組織早期脫離高滲、堿性環(huán)境，早期恢復(fù)生理狀