TFCP2促進肝細胞肝癌遷移侵襲的分子機制.pdf

1、背景與目的:
　　 轉錄因子TFCP2(transcription factor CP2)高表達于人肝癌組織并已被確定為促癌基因，其表達水平與腫瘤的分級分期相關。研究表明TFCP2參與了肝癌遷移侵襲、腫瘤血管形成等腫瘤惡性生物學行為過程。然而有關TFCP2發(fā)揮促進肝癌細胞遷移侵襲等生物學行為過程的具體機制仍不明確。本研究旨在闡明TFCP2參與肝癌遷移侵襲的具體分子機制。
　　 方法:
　　 在高表達TFCP2的肝

2、癌細胞系HepG2與BEL-7402中沉默TFCP2的表達，在低表達TFCP2的細胞系Hep3B及SK-HEP-1中過表達TFCP2，研究TFCP2對肝癌細胞系的增殖、遷移侵襲等惡性生物學行為的影響。通過mRNA芯片檢測HepG2沉默TFCP2后基因表達譜的改變，通過GO(Gene Ontology)及pathway分析TFCP2參與的生物學功能。以及CHIP on chip在SK-HEP-1細胞中尋找TFCP2對細胞侵襲與轉移調控的潛

3、在靶基因;并用western進一步驗證TFCP2與候選靶基因之間的調控模式。通過TESS軟件預測TFCP2與啟動子區(qū)域結合的結構域，并對啟動子全長進行性的5'缺失，通過雙熒光素酶報告系統檢測TFCP2對候選靶基因啟動子是否具有調節(jié)作用并確定最小啟動區(qū);進一步通過電泳遷移率實驗(EMSA)驗證TFCP2對靶基因最小啟動子是否具有直接結合作用。
　　 結果:
　　 沉默TFCP2后顯著降低了肝癌細胞的增殖、遷移侵襲能力;相反

4、過表達TFCP2可提高肝癌細胞的增殖、遷移侵襲能力。mRNA芯片檢測HepG2沉默后基因轉錄組水平的改變，發(fā)現TFCP2調控的諸多通路與肝癌細胞的惡性生物學功能有關;SK-HEP-1細胞中的CHIP on chip進一步發(fā)現對細胞遷移侵襲相關分子FN1(fibronectin1)及TJP1(tight junction protein1)的啟動子有結合作用。Western確定了TFCP2正向調節(jié)FN1以及反向調節(jié)TJP1的作用，從而實現

5、對肝癌細胞遷移侵襲能力的調控。熒光雙報告檢測發(fā)現TFCP2對FN1啟動子具有正向調節(jié)作用，并鑒定最小啟動子(-471～-271)，EMSA實驗證實了FN1最小啟動子區(qū)域存在與TFCP2結合的順式作用元件。
　　 結論:
　　 本研究首次闡明TFCP2在促進肝癌細胞遷移侵襲過程中的分子機制，TFCP2通過上調FN1及下調TJP1進而調節(jié)細胞的遷移侵襲能力。并進一步鑒定轉錄因子TFCP2對FN1實現調控的最小啟動子及其發(fā)揮結