microRNA-224參與調(diào)控肝癌細(xì)胞遷移和侵襲的機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的: MicroRNAs(miRNAs)是一類分布廣泛的非編碼蛋白質(zhì)的小RNAs,通過與靶mRNA分子的3'端非編碼區(qū)互補結(jié)合,在翻譯水平特異性抑制其靶基因的表達(dá),參與調(diào)節(jié)多種疾病發(fā)生的生物學(xué)信號通路。研究表明,miRNAs的突變或者異位表達(dá)與多種人類腫瘤相關(guān),大約50％miRNAs在人類基因組上定位于與腫瘤相關(guān)的脆性位點,提示miRNAs在腫瘤發(fā)生過程中起著至關(guān)重要的作用,并具有類似抑癌基因(tumor suppressor

2、miRNAs,TS-miRs)或癌基因(oncogenic miRNAs,oncomiRs)的功能。
　　肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的發(fā)生發(fā)展是一個涉及多基因、多步驟和多通路改變的漸進(jìn)過程,具有惡性程度高、侵襲轉(zhuǎn)移快和預(yù)后差的特點,其癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移是治療的一大難題,也是決定其預(yù)后的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。現(xiàn)已證實多個miRNAs涉及到肝癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。
　　和肝癌密切相關(guān)的miRNA關(guān)系網(wǎng)中

3、,miRNA-224作為特異的癌性miRNA被廣泛研究。miR-224:小的非編碼RNA家族成員之一,位于chrxq28,GABRE基因區(qū),一個已知的轉(zhuǎn)錄靜止區(qū)。miR-224作為重要的癌性miRNA在多種腫瘤:胰腺癌,卵巢癌,乳腺癌等中被報道高表達(dá),我們前期的實驗結(jié)果顯示其在肝癌細(xì)胞中也高表達(dá)并參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的遷移,但是具體的機(jī)制尚不明確。此次研究旨在明確miRNA-224直接調(diào)控的靶基因以及探討其參與調(diào)控肝癌細(xì)胞侵襲和遷移的可能機(jī)

4、制。
　　方法:
　　1.通過熒光素酶報告基因系統(tǒng)、載體構(gòu)建和western blot實驗進(jìn)行靶基因驗證。
　　2.通過RNA干擾技術(shù)、matrigel侵襲實驗等實驗方法證實HOXD10基因是miR-224調(diào)控肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子。
　　3.通過western blot實驗以及細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)等實驗方法證實miR-224通過HOXD10影響MMP-9以及p-PAK4表達(dá)進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞侵襲和遷移。
　　

5、結(jié)果:
　　1.miR-224在肝癌細(xì)胞中高表達(dá),并且表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的侵襲潛能正相關(guān)。高表達(dá)的miR-224促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲以及遷移。
　　2.HOXD10是miR-224直接調(diào)控的靶基因。
　　3.miR-224通過HOXD10對下游分子p-PAK4以及MMP-9進(jìn)行調(diào)控,進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。
　　結(jié)論:在肝細(xì)胞肝癌中,miR-224通過HOXD10影響p-PAK4以及MMP-9的表達(dá)進(jìn)而參