酪絲亮肽在人肝癌BEL-7402細(xì)胞中的定位及其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的初步研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文酪絲亮肽在人肝癌BEL-7402細(xì)胞中的定位及其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的初步研究姓名：簡序申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：姚智20080501天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Y S L 。2 ．合成的熒光標(biāo)記Y S L 性質(zhì)穩(wěn)定：在．2 0 ℃條件下避光保存兩周，Y S L 和5 ( 6 )羧四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯結(jié)合穩(wěn)定未發(fā)生解離，標(biāo)記Y S L 的熒光強(qiáng)度和熒光光譜也未發(fā)生明顯的變化。并且熒光標(biāo)記Y S L 體外損傷

2、人肝癌B E L ．7 4 0 2 細(xì)胞使之釋放的L D H 與標(biāo)記前相比未發(fā)生明顯的下降( P > O ．0 5 ) ，即標(biāo)記前后Y S L 的抗腫瘤生物學(xué)活性未發(fā)生明顯改變。3 ．熒光標(biāo)記Y S L 在體外與人肝癌B E L 一7 4 0 2 細(xì)胞共同孵育時能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并且在細(xì)胞中呈聚集分布，與等濃度的5 ( 6 ) T A M R AS E 在細(xì)胞的分布有明顯的差別；標(biāo)記Y S L 主要分布于B E L ．7 4 0 2

3、 細(xì)胞的細(xì)胞漿中，并且與腫瘤細(xì)胞的線粒體呈共定位。4 ．Y S L ( 1 ．6 m g ／m 1 ) 在體外作用B E L ．7 4 0 2 細(xì)胞能夠使細(xì)胞膜的微黏度增加，降低細(xì)胞膜的流動性；還可以降低腫瘤細(xì)胞膜的膜電位，造成細(xì)胞膜去極化。5 ．Y S L 直接作用于體外分離的人肝癌B E L ．7 4 0 2 細(xì)胞線粒體后，能夠降低線粒體膜電位，影響線粒體膜通透性，造成線粒體腫脹。6 ．在人肝癌B E L 一7 4 0 2 細(xì)胞中檢

4、測到P E P T l 蛋白的表達(dá)，P E P T l 蛋白在B E L ．7 4 0 2 細(xì)胞主要分布在細(xì)胞的胞膜和胞漿。7 ．P E P T l 的作用底物G L Y - S A R C O S I N E 、G L Y - G L N 和G L Y - G L Y - G L Y 可以減弱Y S L 對人肝癌B E L ．7 4 0 2 細(xì)胞增殖的抑制作用，降低標(biāo)記Y S L 在體外進(jìn)入人肝癌B E L 一7 4 0 2 細(xì)胞的數(shù)

5、量。8 ．Y S L ( 1 ．6 m g ／m 1 ) 能夠在體外上調(diào)人肝癌B E L ．7 4 0 2 細(xì)胞中P E P T lm R N A 水平。結(jié)論：應(yīng)用熒光物質(zhì)5 , 6 羧四甲基羅丹明琥珀酰亞氨酯可以穩(wěn)定地標(biāo)記Y S L ，并保持Y S L 原有的抗腫瘤生物活性。Y S L 可能是跨膜進(jìn)入到腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤作用的，Y S L 進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的過程可能與腫瘤細(xì)胞中的小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P E P T l 的轉(zhuǎn)運(yùn)功能有關(guān)。進(jìn)入