腫瘤相關巨噬細胞中EGFR活化對上皮性卵巢癌惡性行為的影響及機制研究.pdf

1、上皮性卵巢癌（Epithelial Ovarian Cancer，EOC）是婦科腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一，卵巢癌細胞在腹腔內(nèi)的廣泛侵襲轉(zhuǎn)移是導致患者預后差的重要原因。微環(huán)境中腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated macrophages，TAMs)在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用越來越受到重視。巨噬細胞具有可塑性，不同的環(huán)境中，可以分化為不同的亞群（如M1、 M2），不同亞群在分子表型及功能上存在顯著差異。TAMs表現(xiàn)為M2型，具

2、有促進腫瘤進展的作用。
　　表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）活化在腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。近來，巨噬細胞中EGF信號通路的作用也成為關注的熱點。為探討TAMs在上皮性卵巢癌進展中的作用和活化TAMs中EGF/EGFR信號通路對上皮性卵巢癌惡性行為的影響及分子機制，本課題研究分為以下三個部分:
　　第一部分，分析TAMs的數(shù)量及比例與EOC患者臨床病理特征及

3、預后的關系。收集67例2007年1月至2008年12月期間在我院婦科腫瘤科診斷為EOC且腹水不少于200ml患者的臨床病理資料，采用免疫組織化學及流式細胞術方法分析原發(fā)卵巢癌組織及腹水中CD163+TAMs的數(shù)量及比例，統(tǒng)計分析上述指標與患者臨床病理特征及預后的關系。結(jié)果顯示:癌組織中CD163+TAMs的數(shù)量與組織分化程度、FIGO(International Federation of Gynaecology and Obstetr

4、ics)分期及患者對鉑類治療的反應密切相關;腹水中，TAMs的比例與FIGO分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、腹水量、患者對化療及鉑類治療的反應密切相關;并且癌組織中TAMs數(shù)量是患者無疾病進展生存期及總生存期的獨立預后因素。
　　第二部分，分析EGF在外周血單核細胞向TAMs分化中的作用。分離培養(yǎng)健康志愿者外周血單核細胞(Peripheral blood monocytes，MOs)及EOC患者腹水中TAMs，比較EGF處理后的MOs與TA

5、Ms分子表型和分泌細胞因子的差異，Transwell侵襲實驗、MTT增殖實驗及單層傷口愈合實驗(Wound healing assay)檢測不同處理后的條件培養(yǎng)基對卵巢癌細胞SKOV3侵襲、增殖及遷移能力的影響。結(jié)果表明:EGF在體外可誘導外周血來源單核細胞分化為M2型巨噬細胞樣TAMs，其分子表型和分泌型表現(xiàn)為CD163highlL-10highTGF-βhighlL-8high。EGF刺激MOs后收取的條件培養(yǎng)上清可促進卵巢癌細胞的

6、侵襲、增殖及遷移。
　　第三部分，TAMs中EGFR活化促進EOC惡性行為的機制研究。利用EGFR的單克隆抗體西妥昔單抗(Cetuximab)，PI3K抑制劑LY294002和ERK抑制劑PD98095檢測不同處理后TAMs分泌IL-10的變化。其次，通過Transwell侵襲實驗、MTT增殖實驗及單層傷口愈合實驗檢測抑制TAMs培養(yǎng)上清中IL-10作用的條件培養(yǎng)基對卵巢癌細胞SKOV3侵襲、增殖及遷移能力的影響。結(jié)果顯示:24h

7、時，EGF（0.01μg/ml—1.0μg/ml）刺激TAMs分泌IL-10存在濃度依賴。在TAMs中，EGF與其受體EGFR結(jié)合后可能通過其下游PI3K/AKT和ERK兩條信號通路促進IL-10的分泌。并且，含有IL-10的TAMs培養(yǎng)上清液可能通過上調(diào)卵巢癌細胞中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達水平促進卵巢癌細胞的侵襲、增殖和遷移。
　　綜上所述，得出以下結(jié)論:
　　(1)原發(fā)EOC癌組

8、織及腹水中CD163+TAMs的數(shù)量及比例與EOC的惡性程度密切相關，表達越高，提示患者的疾病惡性程度越高。
　　(2)EGF在體外可誘導外周血來源單核細胞分化為具有M2型巨噬細胞特征（CD163 highlL-10highTGF-βhighlL-8hi曲）的TAMs，并且EGF刺激MOs后收取的條件培養(yǎng)上清可促進卵巢癌細胞的侵襲、增殖及遷移。
　　(3)EGF與其受體EGFR結(jié)合后可能通過其下游PI3K/AKT和ERK兩條