Rock信號(hào)通路參與TNF-α刺激兔基底動(dòng)脈平滑肌增殖的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是出血性卒中較為常見的疾病,除了發(fā)病前期的高病死率外, SAH后期較多因素引起的腦血管痙攣(cerebral vasospasm,CVS)的發(fā)生率也很高[1]。CVS引起的缺血性腦損害,成為SAH后期致死和致殘的重要原因。因此預(yù)防和治療CVS是臨床上亟待解決的問題。
　　迄今為止,已有比較多的學(xué)者對(duì)SAH后CVS的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行了研究

2、,力圖闡明其發(fā)生機(jī)制從而探索出有效的治療方法,但至今其具體發(fā)生機(jī)制仍未能夠完全闡明。但是隨著相關(guān)研究的深入,我們對(duì)于SAH后CVS發(fā)生發(fā)展機(jī)制的認(rèn)識(shí)也逐漸加深。以往大多數(shù)研究是對(duì)于SAH后的致痙攣因子展開,并嘗試應(yīng)用相應(yīng)致痙因子阻滯劑來防治CVS,但效果不佳。因此SAH后受累相關(guān)動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖引發(fā)的管腔狹窄及管壁增厚等病理形態(tài)改變引起了相關(guān)學(xué)者專家的注意,并

3、且成為了目前研究SAH后CVS發(fā)生的新熱點(diǎn)。在SAH后CVS發(fā)生的腦血管壁增殖過程中,炎性因子與其關(guān)系密切。
　　Rock信號(hào)通路在生物體內(nèi)發(fā)揮著廣泛的作用。有研究表明Rock信號(hào)可能通過誘導(dǎo)血管平滑肌收縮而與CVS密切相關(guān),臨床上也使用一種Rock抑制劑法舒地爾治療CVS。但目前對(duì)于SAH后Rock信號(hào)是否參與炎性因子引起的VSMCs異常增殖和CVS的發(fā)生鮮有報(bào)道。所以進(jìn)一步闡明Rock信號(hào)通路在炎性因子引起的VSMCs增殖中的

4、具體作用,對(duì)于明確SAH后CVS發(fā)生的具體機(jī)制,從而在臨床上能夠采取相應(yīng)措施阻斷其發(fā)生發(fā)展具有重要的意義。
　　方法:
　　1.組織塊法培養(yǎng)家兔VSMCs并鑒定;
　　2.將細(xì)胞進(jìn)行分組:陰性對(duì)照組,TNF-α處理組,Y-27632干擾組,檢測各組細(xì)胞的增殖及細(xì)胞周期;
　　3.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)及Western-blot檢測各分組VSMCs中PCNA蛋白的表達(dá)及分布。
　　結(jié)果:
　　1.成功利用組織

5、塊法原代培養(yǎng)出家兔基底動(dòng)脈VSMCs,同時(shí)完成鑒定工作;
　　2.CCK-8法檢測提示TNF-α顯著促進(jìn)VSMCs的增殖(P<0.01),Y-27632呈濃度依賴性的抑制TNF-α的促增殖作用(P<0.01);
　　3.流式結(jié)果顯示:TNF-α刺激VSMCs后與對(duì)照組相比,處于G0/G1期細(xì)胞比例明顯降低,S期+G2/M期細(xì)胞比例明顯增高(P<0.05),Y-27632預(yù)處理后此種變化被逆轉(zhuǎn);
　　4.免疫細(xì)胞化學(xué)及W

6、estern-blot檢測結(jié)果顯示PCNA蛋白表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi),TNF-α顯著增加PCNA于細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)(P<0.01),Y-27632具有顯著的逆轉(zhuǎn)TNF-α促PCNA表達(dá)的作用(P<0.05);
　　結(jié)論:
　　1.應(yīng)用組織貼塊法可成功培養(yǎng)出家兔基底動(dòng)脈VSMCs;
　　2.TNF-α可以通過加速細(xì)胞周期的進(jìn)程來促進(jìn)VSMCs的增殖,這一促增殖作用中Rock信號(hào)通路發(fā)揮了重要的作用;
　　3.Y-27632通