微水相酶促肌肽類(lèi)似物的合成與分析.pdf

1、微水相酶催化合成技術(shù)具有條件溫和、專(zhuān)一性強(qiáng)、成本低、溶劑和催化劑可重復(fù)利用、合成產(chǎn)物光學(xué)純度高等優(yōu)點(diǎn)。肌肽（β-Ala-L-His）是一種高效抗氧化劑，廣泛應(yīng)于在生物、化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，是一種具有開(kāi)發(fā)前景的生物活性肽，成為國(guó)內(nèi)外研究開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)。 本文研究了用正丁醇或四氫呋喃（THF）為溶劑，以L-組氨酸或4,5-二羧酸咪唑及L-丙氨酸（L-Ala）為底物，α-胰凝乳蛋白酶催化合成肌肽及肌肽類(lèi)似物，分析驗(yàn)證合成產(chǎn)物的光譜、波譜、T

2、LC等數(shù)據(jù)，系統(tǒng)考察合成肌肽及其類(lèi)似物的工藝條件，在此基礎(chǔ)上通過(guò)正交試驗(yàn)獲取了合成肌肽類(lèi)似物的最適條件。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在正丁醇微水相及THF微水相中，α-胰凝乳蛋白酶能分別催化合成肌肽及其類(lèi)似物。 合成物在TLC硅膠G60上出現(xiàn)一個(gè)新斑點(diǎn)；紫外分析指出在240、310、330nm出現(xiàn)吸收峰；高效液相色譜的保留時(shí)間為4.25min；1H核磁共振圖譜有五組峰。由此證實(shí)該產(chǎn)物為5-丙氨酰胺-4-羧酸-咪唑。 研究肌肽

3、類(lèi)似物的單因素試驗(yàn)結(jié)果指出，35℃時(shí)產(chǎn)率為20.0％；反應(yīng)70min達(dá)到平衡，產(chǎn)率為46.4％。光照對(duì)肌肽類(lèi)似物產(chǎn)率沒(méi)有影響。Α-胰凝乳蛋白酶在pH 7.5～9.5內(nèi)維持較高活性，最適pH8.5，產(chǎn)率為55％。在4,5-二羧酸咪唑：L-丙氨酸＝1：1時(shí)，加入4％（W％）α-胰凝乳蛋白酶，產(chǎn)率為44.5％；含水量為10％，產(chǎn)率為42.3％。4,5-二羧酸咪唑：L-丙氨酸＝1.5：1，產(chǎn)率達(dá)到45.4％。 L25（65）正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4、指出，含水量、時(shí)間、底物比例、溫度和pH顯著影響肌肽類(lèi)似物的產(chǎn)率，其中溫度和pH值達(dá)到極顯著。合成肌肽類(lèi)似物的最適條件是：在THF：蒸餾水＝1：0.16微水相中， 4,5-二羧酸咪唑：L-Ala＝1：3，酶加入量為底物量的1％，35℃反應(yīng)1.5h，肌肽類(lèi)似物的產(chǎn)率為63.4％。 在正丁醇：pH8.0磷酸緩沖溶液＝1：0.08微水相中，L-組氨酸（L-His）：L-Ala＝1：1，酶加入量為底物量的3％，40℃反應(yīng)1.5h，肌肽合