聚乙烯亞胺及其衍生物和納米顆粒對(duì)PCR優(yōu)化作用機(jī)制研究.pdf

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一種在體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的核酸擴(kuò)增技術(shù)。該技術(shù)是目前最常用、也最重要的分子生物學(xué)技術(shù)之一。目前PCR技術(shù)可以被應(yīng)用到測(cè)序，病原菌檢測(cè)，遺傳分析等領(lǐng)域。PCR技術(shù)有很高的靈敏性，但是它的特異性卻不是那么理想。PCR反應(yīng)的機(jī)理很復(fù)雜，在實(shí)際中受到一些因素的影響不可避免。在實(shí)際中，PCR會(huì)遇到低擴(kuò)增、彌散、特異性差等問(wèn)題。有報(bào)道證明PCR添加劑可以改善上述情況。

2、因此，研究增強(qiáng)PCR反應(yīng)效率和特異性的增強(qiáng)劑是必要的，研究?jī)?yōu)化PCR反應(yīng)的機(jī)理是一個(gè)挑戰(zhàn)。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)了一種新的增強(qiáng)劑：聚乙烯亞胺(PEI)能夠提高PCR反應(yīng)的特異性，并基于這一現(xiàn)象對(duì)添加劑對(duì)PCR的影響機(jī)理做了研究。
　　 本研究建立了兩套PCR體系用來(lái)檢驗(yàn)增強(qiáng)劑對(duì)于PCR的作用。一套體系是以綠膿桿菌基因組為模板的二次擴(kuò)增非特異體系；一套體系是以λDNA為模板擴(kuò)增14.385kb的長(zhǎng)片段體系。兩套體系加入了PEI

3、或其衍生物后，特異性均變好。
　　 文獻(xiàn)報(bào)道添加劑優(yōu)化PCR反應(yīng)有若干種機(jī)理假設(shè)。其中MWCNT優(yōu)化PCR反應(yīng)是基于它良好的熱傳導(dǎo)性能。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)PEI修飾的MWCNT，MWCNT-PEI有同樣的優(yōu)化效果，但用量卻少很多?？紤]到PEI本身表面帶有陽(yáng)離子。本人所在實(shí)驗(yàn)室合成了表面帶正電的50％乙?；腜EI(PEI-Ac50)和100%乙?；疨EI(PEI-Ac)和其它衍生物。將它們加入到建立的非特異體系當(dāng)中，最優(yōu)濃度PEI<

4、PEI-Ac50　　 本研究還研究了分子形貌對(duì)PCR反應(yīng)的影響。PEI是一種超支化的大分子，本身比較柔軟。本研究通過(guò)PEI包裹金顆粒(PEI-AU)，使PEI