糖尿病創(chuàng)面與正常皮膚創(chuàng)面差異表達(dá)基因的篩選研究.pdf

1、目的:應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片對(duì)糖尿病大鼠創(chuàng)面與正常大鼠創(chuàng)面基因表達(dá)譜進(jìn)行對(duì)比分析并篩選差異基因,初步探討糖尿病大鼠創(chuàng)面與正常大鼠創(chuàng)面基因表達(dá)的特征及其可能的生物學(xué)意義,為治療糖尿病創(chuàng)面提供新的思路和線索。
　　方法:將 SD雄性大鼠隨機(jī)分為糖尿病組和正常對(duì)照組。一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ,),劑量為65 mg/kg,制備成糖尿病大鼠模型。給藥3周后抽取正常大鼠和穩(wěn)定成模的糖尿病大鼠,在背部制成直徑2.0

2、 cm的圓形全層皮膚缺損創(chuàng)面。72小時(shí)后取創(chuàng)面組織,TrizoI一步法提取組織總RNA,瓊脂糖甲醛變性凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)檢。逆轉(zhuǎn)錄法將 cy3熒光標(biāo)記到組織的cDNA上,制成探針后與表達(dá)譜芯片雜交,用Agilent G2565CA Microarray Scanner掃描,即得雜交圖片。隨后用Feature Extraction(v10.7)軟件分析雜交圖片并提取數(shù)據(jù)、博奧表達(dá)譜芯片 Analyzer軟件進(jìn)行分析,把圖像信號(hào)轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào),

3、以2倍差異表達(dá)值篩選出差異表達(dá)基因。選擇其中上調(diào)或下調(diào)明顯的基因,用實(shí)時(shí) RT—PCR技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證相關(guān)基因的可靠性。同時(shí),對(duì)篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行基因功能分類。
　　結(jié)果:與正常大鼠創(chuàng)面組比較,糖尿病大鼠組創(chuàng)面差異表達(dá)基因2206個(gè),其中上調(diào)基因785個(gè)、下調(diào)基因1421個(gè),明顯上調(diào)基因231個(gè),明顯下調(diào)基因463個(gè),實(shí)時(shí) RT—PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片篩選結(jié)果一致。根據(jù)基因功能分類發(fā)現(xiàn)差異基因涉及糖代謝、蛋白質(zhì)合成、離子通道、神