靶向PDGFr-α的RNA干擾對(duì)體外視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究靶向PDGFR-α的RNA干擾對(duì)體外人視網(wǎng)膜色素上皮（hRPE）細(xì)胞增殖和凋亡的影響，為臨床治療增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮（hRPE）細(xì)胞，利用陽(yáng)離子脂質(zhì)體（LipofectammineTM2000）將化學(xué)合成的PDGFR-αshRNA轉(zhuǎn)染入hRPE細(xì)胞，倒置光學(xué)顯微鏡下觀察hRPE細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，按照轉(zhuǎn)染物的不同分為4組，即空白對(duì)照組;陰性對(duì)照（NC-shRNA

2、）組;1.0μg/ml PDGFR-αshRNA組;2.0μg/mlPDGFR-αshRNA組。PDGFR-αshRNA作用于hRPE細(xì)胞24h、48h、72h后，MTT法檢測(cè)RPE細(xì)胞增殖的變化，并計(jì)算抑制率;PDGFR-αshRNA作用hRPE細(xì)胞48h后，RT-PCR法檢測(cè)hRPE細(xì)胞中PDGFR-αmRNA的表達(dá)變化，應(yīng)用Western blot和免疫組化技術(shù)檢測(cè)PDGFR-α的蛋白表達(dá)水平;Hoechst33258熒光染色分析

3、細(xì)胞的凋亡情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)PDGFR-αshRNA對(duì)hRPE細(xì)胞周期和凋亡的影響。
　　結(jié)果：PDGFR-αshRNA轉(zhuǎn)染hRPE細(xì)胞48h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞皺縮，間隙增寬，貼壁不牢及大量死亡細(xì)胞漂浮等現(xiàn)象，與低濃度用藥組相比，高濃度用藥組細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞皺縮，核碎裂，死亡細(xì)胞漂浮現(xiàn)象更明顯。PDGFR-αshRNA作用于hRPE細(xì)胞24-72h，hRPE細(xì)胞的增殖受到抑制，且抑制作用隨濃度的升高和時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染后24

4、、48、72h，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率分別為（9.4±0.03;20.9±0.02;32％±0.01）％、（14.9±0.15;31.3±0.01;51.7±0.01）％與空白對(duì)照組(0;0;0)％和NC-shRNA組（1.7±0.04;2.6±0.02;2.4±0.01）％相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。PDGFR-αshRNA作用hRPE細(xì)胞48h后，PDGFR-α基因的mRNA和蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比明顯下調(diào)，并隨藥物濃度的升高而

5、增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);PDGFR-αshRNA作用hRPE細(xì)胞48h后，熒光染色結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞出現(xiàn)核致密濃染、核分裂等細(xì)胞調(diào)亡的形態(tài)學(xué)改變與對(duì)照組相比明顯增多，流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果顯示PDGFR-αshRNA作用下細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比明顯升高，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率分別為:（37.2±1.73）％、（51.8±1.41）％，與對(duì)照組（11.5±0.95）％和NC-shRNA組（13.8±1.61）％相比較，

6、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示PDGFR-αshRNA作用下細(xì)胞被阻滯于G1期，實(shí)驗(yàn)組G1期細(xì)胞百分率分別為:（64.44±1.13）％，（75.99±0.84）％，與空白對(duì)照組（54.11±1.13）％和NC-shRNA組（55.53±1.81）％相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：⑴PDGFR-αshRNA能抑制hRPE細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并將細(xì)胞阻滯于G1期。⑵PDG