單核細(xì)胞AMPK基因表達(dá)對(duì)人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性影響和機(jī)制的研究.pdf

1、背景：
　　急性冠脈綜合征是一種慢性炎癥性疾病。內(nèi)皮功能的損傷、冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的形成、以及巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞的侵潤(rùn)都是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。急性冠脈綜合征包括ST段抬高性心肌梗死、非ST段抬高性心肌梗死、不穩(wěn)定心絞痛，是導(dǎo)致冠心病死亡率升高的重要原因。而其發(fā)生主要取決于冠狀動(dòng)脈斑塊的穩(wěn)定性上，而不是斑塊的大小。因此如何調(diào)節(jié)斑塊穩(wěn)定性成為冠心病研究的熱點(diǎn)。單核細(xì)胞是很多炎癥細(xì)胞的來(lái)源，分化成巨噬細(xì)胞，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)

2、脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，分泌多種炎性因子，趨化吞噬，向斑塊內(nèi)浸潤(rùn)，在斑塊穩(wěn)定性方面發(fā)揮巨大作用。在急性冠脈綜合征患者中，冠脈粥樣斑塊常表現(xiàn)為易損斑塊，其特征是薄的纖維帽和大的脂質(zhì)核。而單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)在易損斑塊的形成和發(fā)展中發(fā)揮了巨大的作用。單核細(xì)胞可以促進(jìn)膽固醇向脂質(zhì)核內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)，導(dǎo)致斑塊穩(wěn)定性下降，斑塊破裂，血栓形成等斑塊事件。自體吞噬簡(jiǎn)稱自噬，作為不同于凋亡和壞死的另外一種方式導(dǎo)致Ⅱ型細(xì)胞死亡。最近研究表明自噬在動(dòng)脈粥樣硬化疾病中起到了

3、積極的作用，在心肌缺血中自體吞噬可以保護(hù)缺血心肌組織，在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中，可以通過(guò)調(diào)節(jié)多種炎癥因子，調(diào)控膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)等起到保護(hù)作用。AMP蛋白激酶(AMPK)在細(xì)胞能量代謝中具有相當(dāng)重要的地位，它可以調(diào)節(jié)糖脂代謝，在葡萄糖缺乏的時(shí)候，促進(jìn)能量代謝由有氧糖酵解向氧化代謝轉(zhuǎn)變。AMPK的上調(diào)通過(guò)調(diào)節(jié)結(jié)節(jié)硬化復(fù)合物(TSC1/2)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)來(lái)促進(jìn)自噬。目前單核細(xì)胞通過(guò)什么方式影響冠脈斑塊易損性方面研究還不是很充足，我們的研

4、究闡述外周血單核細(xì)胞AMPK的表達(dá)和斑塊破裂之間的關(guān)系，并嘗試說(shuō)明斑塊易損性、自體吞噬以及AMPK之間的相互關(guān)系。
　　目的：
　　1.探討單核細(xì)胞AMPK活化是否對(duì)冠狀動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性產(chǎn)生有益影響。
　　2.初步探討AMPK對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊產(chǎn)生影響的機(jī)制。
　　方法：
　　選取2013年11月到2014年6月，在齊魯醫(yī)院心內(nèi)科住院治療并行冠狀動(dòng)脈造影的冠心病患者140例，排外結(jié)核、腫瘤、感染以及全身免

5、疫性疾病。分離培養(yǎng)不同患者的血單核細(xì)胞并參考美國(guó)心臟協(xié)會(huì)(American Heart Association，AHA)的診斷標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)分為4組:ST段拾高性心肌梗死組、非ST段抬高性急性冠脈綜合征組、穩(wěn)定性心絞痛組、正常對(duì)照組。用western blot技術(shù)檢測(cè)單核細(xì)胞中AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、自體吞噬相關(guān)蛋白beclin-1和ATG7的表達(dá)水平，觀察不同組在不同斑塊負(fù)荷下的單核細(xì)胞AMPK活化程度以及自體吞噬水

6、平的變化。
　　結(jié)果：
　　我們發(fā)現(xiàn)ST段抬高性心肌梗死組、非ST段抬高性急性冠脈綜合征組中人單核細(xì)胞AMPK活化程度與空白對(duì)照組和穩(wěn)定性心絞痛組相比顯著下(p＜0.05)。ST段抬高性心肌梗死組、非ST段抬高性急性冠脈綜合征組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，空白對(duì)照組和穩(wěn)定性心絞痛組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與之對(duì)應(yīng)的，在ST段抬高性心肌梗死組、非ST段抬高性急性冠脈綜合征組自噬相關(guān)蛋白beclin-1和ATG7同樣顯著下降(p＜0.05)

7、和AMPK活化趨勢(shì)相同。較其他三組，p-mTOR在ST段抬高性心肌梗死組顯著升高(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　通過(guò)比較不同斑塊負(fù)荷的不同組的AMPK活化程度發(fā)現(xiàn)AMPK活化可能降低動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的易損性，使斑塊穩(wěn)定，減少急性冠脈綜合征、急性心梗發(fā)生率。另外我們通過(guò)檢測(cè)自噬水平發(fā)現(xiàn)AMPK活化水平與自噬相關(guān)蛋白變化趨勢(shì)相同。AMPK可能通過(guò)影響自噬來(lái)改變斑塊的穩(wěn)定性，以達(dá)到增加斑塊穩(wěn)定性的效果。AMPK激活劑或許能給冠