L-鳥氨酸高產(chǎn)菌株選育及發(fā)酵條件研究.pdf

1、L-鳥氨酸(L-Orn)是一種非蛋自質(zhì)氨基酸，其在醫(yī)藥業(yè)和食品業(yè)的廣泛應(yīng)用使得發(fā)酵法生產(chǎn)Orn成為趨勢(shì)。本文建立了一種快速簡便的L-Orn定量方法，并對(duì)L-Orn產(chǎn)生菌的定向選育、搖瓶發(fā)酵條件分別進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下： [1]研究了發(fā)酵液中L-Orn分析方法，采用紙層析法定性、酸性茚三酮法定量。通過對(duì)發(fā)酵液紙層析法定性，可知Orn發(fā)酵液中主要含有4種氨基酸：L-Orn、L-Cit、L-hrg、L-Glu，比移值分別為0.71

2、7、0.564、0.825、0.172。酸性茚三酮法操作方法：顯色液是25mg/ml茚三酮溶液，按分析液：顯色液：冰乙酸=1：1：1的體積比在100℃水浴中反應(yīng)60min，冷卻，加適量冰乙酸，測(cè)515nm處0D值，根據(jù)L-Orn的標(biāo)準(zhǔn)曲線得發(fā)酵液中L-Orn的含量。 [2]以谷氨酸棒桿菌S9114為出發(fā)菌株，經(jīng)<'60>Co γ射線、NTG、U．V．多次復(fù)合誘變，最終選育出遺傳穩(wěn)定的L-Orn生產(chǎn)菌HG106-17，遺傳標(biāo)記為L

3、-hrg<'->+SG<'r>，在未經(jīng)優(yōu)化搖瓶發(fā)酵條件情況下，發(fā)酵72hr可積累L-Orn9.6mg/ml。 [3]種子培養(yǎng)基的最佳組成(％)：葡萄糖3、硫酸銨0.6、玉米漿2ml、酵母膏1.5、K<,2>HPO<,4> 0.1、KH<,2>PO<,4>0.05、MgSO<,4>·7H<,2>O 0.04、FeSO<,4>·7H<,2>O 0.002、MnSO<,4>·7H<,2>O 0.002、pH7.0～7.2。種子培養(yǎng)的最

4、佳控制條件：培養(yǎng)基初始pH 7.0～7.2；裝液量為25ml/250ml三角瓶，棉塞封口；搖瓶轉(zhuǎn)速為96rpm；培養(yǎng)溫度為31℃左右；種齡為18hr；接種量為8％。 [4]發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組成(％)：葡萄糖11、硫酸銨4、玉米漿3ml、K<,2>HPO<,4>0.1、KH<,2>PO<,4> 0.05、MgSO<,4>·7H<,2>O 0.04、FeSO<,4>·7H<,2>O 0.002、MnSO<,4>·7H<,2>O 0.

5、002、pH 7.0～7.2、V<,B1>20 μg、D-生物素10μg、L-精氨酸15mg、CaCO<,3>2(分消)。最佳搖瓶發(fā)酵條件為：發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH 7.2；裝液量為25mL/250三角瓶，棉塞封口；搖瓶轉(zhuǎn)速為150rpm；發(fā)酵溫度為32℃；發(fā)酵周期為72hr。 本文建立的L-Orn測(cè)定方法，快速簡便、準(zhǔn)確度高。一次可測(cè)數(shù)十個(gè)樣液，2hr內(nèi)即可完成，特別適合菌種的誘變篩選。本文選育獲得的L-Orn產(chǎn)生菌HG106-1