還原葉酸載體(RFC)、二氫葉酸還原酶(DHFR)及谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST-π)與骨肉瘤MTX化療耐藥機制的研究.pdf

1、目的：研究RFC（還原葉酸載體）、GST-π（谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶π）、DHFR（二氫葉酸還原酶）mRNA在入骨肉瘤U2-OS細胞系及人骨肉瘤耐藥細胞系U2-OS/R1-R2中的表達差異，并探討其在人骨肉瘤MTX化療耐藥中的意義。 方法：采用沖擊并逐步增加誘導藥物濃度誘導的方法，誘導人骨肉瘤細胞系U2-OS，并建立耐MTX細胞系(U2-OS/R1-R3)； MTT法檢測各細胞株對氨甲喋呤(MTX)，順鉑(DDP)，阿霉素(ADM)及

2、異環(huán)磷酰胺(IFO)的藥物敏感性，計算半數(shù)抑制濃度(IC50)和耐藥指數(shù)(RI)；利用倒置顯微鏡觀察細胞一般形態(tài)改變，繪制生長曲線，檢測細胞生長能力；利用流式細胞儀檢測各細胞株細胞周期分布；利用熒光定量PCR技術(shù)在mRNA水平檢測RFC、GST-π、DHFR在U2-OS及(U2-OS/R1-R3)中的表達。 結(jié)果：本試驗成功建立三株入骨肉瘤耐藥細胞系U2-OS/R1-R3，細胞生長曲線示耐藥細胞株較原代細胞生長時間延長；流式細胞

3、儀測細胞周期結(jié)果示耐藥細胞株阻滯在G1期，MTT法示耐藥細-胞株U2-OS/R1-R3對MTX耐藥指數(shù)分別為原代的49.19、60.13、63.3倍；熒光定量PCR結(jié)果顯示人骨肉瘤耐藥細胞系U2-OS/R1-R3中RFC mRNA的表達為原代U2-OS的0.7139、0.6258、0.4908倍(組間差別有統(tǒng)計學意義，P<0.05)，RFC. mRNA的表達隨腫瘤耐藥性的增加而降低；U2-OS/R1-R3 DHFR mRNA的表達為原代

4、U2-OS的5.3145、12.8937、30.6501倍(組間差別有統(tǒng)計學意義，P<0.05)，DHFR mRNA隨腫瘤耐藥性的增加而增加；U2-OS/R.-R。中GST-πmRNA的表達為原代U2-OS的1.9081、3.5420、4.8319倍（組間差別有統(tǒng)計學意義，P<0.05)，GST-πmRNA的表達隨腫瘤耐藥性的增加而增加. 結(jié)論：MTX耐藥與DHFRmRNA表達增加有關(guān)，與RFCmRNA的表達降低有關(guān)，與GST-