骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療慢性萎縮性胃炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：
　　骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)是一類來源于中胚層的具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞，而且具有低免疫原性、易于培養(yǎng)擴(kuò)增、遺傳背景穩(wěn)定等特點(diǎn)，成為組織工程學(xué)較為理想的種子細(xì)胞。目前已廣泛應(yīng)用于機(jī)體各系統(tǒng)疾病的研究之中，但尚無在慢性萎縮性胃炎(CAG)中的應(yīng)用報(bào)道。CAG以胃固有腺體減少為特征。與胃癌發(fā)生關(guān)系密切，目前尚無理想藥物逆轉(zhuǎn)其萎縮病變。
　　目的：
　　探究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對慢性萎縮性胃炎的治療作用。

2、
　　方法：
　　1.將大鼠隨機(jī)分為模型組和正常組，模型組自由飲用0.1％氨水，前10周用2％水楊酸鈉和30％酒精混合溶液灌胃，后12周用20mmol/L去氧膽酸鈉溶液灌胃；正常對照組正常飲水，用蒸餾水灌胃22周。
　　2.采用全骨髓貼壁法分離純化大鼠BMMSCs，同時提取大鼠胃黏膜勻漿上清液并測定其蛋白濃度為1.5ug/ul，按照150ug/ml對BMMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)5周后利用細(xì)胞免疫熒光方法鑒定細(xì)胞角蛋白以及巢蛋白

3、的表達(dá)。
　　3.將模型大鼠與正常大鼠分別分為細(xì)胞移植組與對照組，在移植組大鼠中，CM-Dil標(biāo)記的BMMSCs按照2×106/只的量，分別通過尾靜脈注射與胃壁注射進(jìn)行移植，模型對照組分別給予尾靜脈或胃壁注射等體積生理鹽水作為對照。細(xì)胞移植2周、4周后分別通過冰凍切片觀察CM-Dil熒光以及FISH方法鑒定BMMSCs在胃內(nèi)定植情況，并觀察胃病理學(xué)指標(biāo)改善情況。
　　結(jié)果：
　　1.建模22周后，模型組大鼠與正常組比較

4、，胃竇腺體萎縮明顯，黏膜層變薄且黏膜肌層相對增厚。炎性細(xì)胞浸潤明顯。
　　2.BMMSCs經(jīng)胃黏膜勻漿上清誘導(dǎo)后第7天開始出現(xiàn)圓形或橢圓形細(xì)胞，5周后鑒定細(xì)胞角蛋白表達(dá)陽性，巢蛋白陰性。
　　3.在胃壁注射BMMSCs組中，于移植后2周，可觀察到CM-Dil標(biāo)記的熒光，4周后未見CM-Dil標(biāo)記的熒光，但在雌鼠中通過FISH發(fā)現(xiàn)BMMSCs在胃內(nèi)的定植。其他各組在觀察時間段內(nèi)均未見BMMSCs定植。BMMSCs移植后4周，萎

5、縮性胃炎模型中移植組與對照組相比，炎性細(xì)胞浸潤明顯減輕(p<0.05)，但萎縮程度與黏膜層厚度比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.綜合應(yīng)用30％酒精、2％水楊酸鈉、20mmol/L的脫氧膽酸鈉及0.1％氨水。22周后成功建立了萎縮性胃炎模型，此模型建立方法簡單，無需特殊設(shè)備和條件。
　　2.胃黏膜勻漿上清液可誘導(dǎo)BMMSCs分化為上皮細(xì)胞。
　　3.BMMSCs通過胃壁注射移植2周、4周后均