牛奶中頭孢類抗生素的免疫層析試紙條和ELISA試劑盒檢測(cè)方法研究.pdf

1、β-內(nèi)酰胺類抗生素是指化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有β-內(nèi)酰胺環(huán)的一類抗生素，主要包括青霉素類和頭孢菌素類，其作用特點(diǎn)是能夠抑制細(xì)菌黏轉(zhuǎn)肽酶的活性，從而阻止細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，呈現(xiàn)殺菌活性。在動(dòng)物生產(chǎn)中，β-內(nèi)酰胺類抗生素廣泛用于控制奶牛的乳房炎，治療動(dòng)物尿道、胃腸道和呼吸道感染等。但由于其使用方法不當(dāng)或不遵守休藥期規(guī)定等原因，均可造成它在畜產(chǎn)品中的殘留，給人類健康帶來嚴(yán)重危害，如產(chǎn)生過敏反應(yīng)、破壞胃腸道菌群平衡和增強(qiáng)細(xì)菌耐藥性等。
　　 本文分

2、別以頭孢氨芐、7-ACA、頭孢羥胺芐、頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢噻呋為半抗原用不同的方法與蛋白偶聯(lián)得到6種免疫原。每種免疫原免疫兩只兔子，經(jīng)過一次初免，3-5次復(fù)免后得到相應(yīng)的多克隆抗體。然后采用間接ELISA測(cè)定效價(jià)，抑制率篩選出具有簇特異性的多克隆抗體。其中頭孢氨芐-BSA為免疫原所得到的抗體具有較高效價(jià)，達(dá)到200000。對(duì)頭孢氨芐、頭孢羥氨芐的50%抑制率(IC50)分別為1.5、2.6 ng/mL。另外，頭孢噻呋-KLH為免疫原

3、的抗體具有較強(qiáng)的特異性，對(duì)其他頭孢類抗生素交叉反應(yīng)率小于10%，IC50值為10 ng/mL。
　　 以頭孢氨芐-BSA為免疫原所得多克隆搞體為研究對(duì)象建立間接競(jìng)爭ELISA(icELISA)和膠體金免疫層析(ICA)方法。兩種方法均能實(shí)現(xiàn)對(duì)多種頭孢類抗生素的多殘留檢測(cè)。其中ELISA試劑盒對(duì)頭孢氨芐、頭孢羥胺芐檢測(cè)限在0.5-5.6ng/mL之間。膠體金免疫層析法通過對(duì)最佳標(biāo)記量、重懸液、墊處理液、金標(biāo)點(diǎn)樣量，包被原包被量等條

4、件的優(yōu)化，對(duì)頭孢氨芐，頭孢羥氨芐的檢測(cè)限達(dá)到10 ng/mL.對(duì)頭孢氨芐，頭孢羥氨芐在牛奶樣本中的添加回收率在71-98%之間，變異系數(shù)最大為11.6。試紙條可在2-8℃保存至少三個(gè)月。測(cè)定40個(gè)樣品，與ELISA做對(duì)照，結(jié)果證明有較好的相關(guān)性。
　　 綜上所述，本研究在成功獲得具有頭孢類抗生素簇特異性的多克隆抗體的基礎(chǔ)上，成功研制了可以實(shí)現(xiàn)多殘留檢測(cè)的ELISA試劑盒和ICA試紙條。兩種方法都具有方便、快速、便攜的特點(diǎn)能夠?qū)崿F(xiàn)