天然紅心鴨蛋蛋黃粉的生物活性及作用機理研究.pdf

1、我國是禽蛋的產(chǎn)銷大國，禽蛋含有豐富的不飽和脂肪酸和氨基酸，具有很高的生物效價，因而深受消費者的喜愛。本文旨在利用現(xiàn)代色譜技術(shù)，建立天然紅心鴨蛋蛋黃中膽固醇高效準確的定量分析方法；并通過動物實驗和分子生物學分析手段和方法，探討天然紅心鴨蛋蛋黃粉對小鼠生長發(fā)育、抗疲勞、耐缺氧、免疫調(diào)節(jié)以及對血脂的影響和作用機理。主要研究結(jié)果如下： 1．天然紅心鴨蛋蛋黃粉中主要成分的分析 建立了一種通過直接皂化－反相高效液相色譜(RPHP

2、LC)快速檢測蛋黃膽固醇含量的分析方法，其RPHPLC分析測定條件為：LC-10AT液相色譜；色譜柱：AgilentZorbaxSB-C18柱(φ4.6mm×250m):流動相：乙睛：甲醇：異丙醇=50:80:10(v／v／v)；柱溫：45℃；進樣量：20uL 流速v=1.3mL/min：檢測波長205nm。在此分析條件下，蛋黃中膽固醇的出峰時間在10min左右，測得天然紅心鴨蛋蛋黃粉和普通鴨蛋蛋黃粉中膽固醇含量分別為24.84mg/g

3、左右和25.75mg/g左右。 通過氣相色譜(GC)分析了蛋黃粉中脂肪酸的組成和含量。其中天然紅心鴨蛋蛋黃粉中不飽和脂肪酸占脂肪酸總量的71.9％，占蛋黃粉量的29.75％。普通鴨蛋蛋黃粉中不飽和脂肪酸占脂肪酸總量的72.5％，占蛋黃粉的26.44％。天然紅心鴨蛋蛋黃粉和普通鴨蛋蛋黃粉中還含有亞油酸(LA)、花生四烯酸(AA)、廿碳五烯酸(EPA)、廿二碳六烯酸(DHA)以及少量的C16:l、C17:1、C20:1和C20:2等

4、不飽和脂肪酸等。 通過高效液相色譜(HPLC)分析了蛋黃粉中氨基酸的組成和含量。其中天然紅心鴨蛋蛋黃粉中氨基酸總含量約為占21.28g/100g，普通鴨蛋蛋黃粉中氨基酸含量約為24.86g/100g。 2．天然紅心鴨蛋蛋黃粉對小鼠生長發(fā)育的影響 動物分組實驗結(jié)果表明，天然紅心鴨蛋蛋黃粉能夠增加生長小鼠的體重。通過病理切片觀察小鼠脾臟組織：發(fā)現(xiàn)天然紅心鴨蛋蛋黃粉增加了小鼠脾臟中白小體(white pulp，白髓)的

5、體積和數(shù)量，這提示天然紅心鴨蛋蛋黃粉有提高機體免疫的作用。 通過病理切片觀察小鼠心臟組織：天然紅心鴨蛋蛋黃粉對心臟沒有明顯的影響。 通過病理切片觀察肝臟和腎臟組織：發(fā)現(xiàn)高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉(19.5g／Kg.d)對小鼠的肝臟有一定的影響。發(fā)現(xiàn)小鼠肝細胞內(nèi)有脂肪浸潤和輕度變性?？赡苁怯捎诮o小鼠喂食了高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉(19.5g／Kg.d)而產(chǎn)生了輕度的脂肪肝病變。對腎臟的切片觀察，高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃

6、粉(19.5g／Kg.d)組小鼠中，有個別小鼠的腎近曲小管上皮細胞輕度變性，通過對腎功能指標分析，隨著天然紅心鴨蛋蛋黃粉劑量的增加，血肌肝的含量有一定的上升趨勢，但與對照組比較，沒有顯著差異，這表明高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉對腎臟沒有構(gòu)成病理性的影響。 對血脂水平的測定結(jié)果表明高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉在顯著增加了小鼠血清總膽固醇(TC)的含量(P<0.01)，但同時也增加了高密度脂蛋白(HDL-C)含量(P<0.01)，對血清

7、甘油三酯(TG)含量沒有顯著影響。分析小鼠肝功能生化指標天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，與對照組相比，其值有所增加，但沒有顯著的差異。通過血象指標分析，高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉組(19.5g／Kg.d)小鼠的白細胞和血小板的數(shù)量都顯著高于對照組(P<0.01)，這提示高劑量的飼喂天然紅心鴨蛋蛋黃粉可能在一定程度上會引起機體的炎癥反應(yīng)。 3.天然紅心鴨蛋蛋黃粉對小鼠抗疲勞和耐缺氧效應(yīng)的影響 動

8、物分組實驗結(jié)果表明：飼喂天然紅心鴨蛋蛋黃粉的小鼠游泳耐受能力和耐缺氧存活時間都有所提高。增加肝糖原和肌糖原的貯備能力，以及肝組織和血清中乳酸脫氫酶(LDH)活力，并降低了血清尿素氮(BUN)含量。實驗結(jié)果初步提示天然紅心鴨蛋蛋黃粉能增加機體抗疲勞及耐缺氧能力。 4.天然紅心鴨蛋蛋黃粉對小鼠免疫調(diào)節(jié)的影響機理研究 對動物進行分組實驗，測定2，4一二硝基氟苯(DNFB)致敏的遲發(fā)性超敏反應(yīng)和血清溶血素水平，通過流式細胞儀(F

9、CM)測定脾臟單細胞懸液中的T細胞表面標記分子的CD3和CD4分子的百分含量，并利用放射免疫分析(R工A)方法測定血清免疫球蛋白(IgG)含量。結(jié)果表明：中劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉(13 g／Kg.d)是能夠增加機體的免疫能力的最佳劑量，能夠調(diào)節(jié)遲發(fā)性超敏反應(yīng)和血清溶血素的水平，增加T細胞表面標記分子CD3和CD4分子和血清IgG的含量。這說明中劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉(13 g／Kg.d)能提高機體的體液免疫和細胞免疫能力。但是高劑量

10、的天然紅心鴨蛋蛋黃粉(19.5 g／Kg.d)卻對調(diào)節(jié)免疫的能力有所下降。這個下降的原因可能與高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉對肝臟病理的影響有一定的關(guān)系。 5．天然紅心鴨蛋蛋黃粉對小鼠肝臟的影響及其機理的研究 對動物進行分組實驗，解剖小鼠測定血清膽堿酯酶(CHE)、肝組織6-酮-前列腺素F<,1>。(6-Ketor-PGF<,1>。)和血栓素B<,2>(TXB<,2>)，以及通過RT-PCR測定肝臟組織中硬脂酰CoA去飽和酶

11、-1(SCD-1)mRNA和肝臟脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)mRNA兩個基因的表達。結(jié)果表明：高脂組(P<0.01=和高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉組(19.5 g／Kg.d)(P<0.05)的CHE與對照組相比，有顯著的增加，這說明高脂飲食和高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉在一定程度上引起了輕度脂肪肝。高脂組的TXB<,2>／6-Keto-PGF<,1>。的比例明顯高于正常組(P<0.01)，添加天然紅心鴨蛋蛋黃粉的小鼠TXB<,2>／6-K

12、eto-PGF<,1>。的比例與對照組相比，沒有顯著的差異，說明高脂飲食會導致TXB<,2>／6-Keto-PGF<,1>。比例失調(diào)，進而會影響肝臟內(nèi)血液的流動性，而天然紅心鴨蛋蛋黃粉組小鼠對此沒有明顯的影響。 通過對肝臟SCD-1mRNA和L-FABPmRNA兩個基因表達的分析，發(fā)現(xiàn)高脂組小鼠的肝臟SCD-1mRNA的表達顯著受到抑制，而L-FABPmRNA表現(xiàn)出高度的表達，說明高脂飲食中發(fā)生肝臟脂肪酸代謝紊亂，從而導致血脂升

13、高。試驗組中高劑量的天然紅心鴨蛋蛋黃粉(19.5 g／Kg.d)組小鼠肝臟SCD-lmRNA的表達受到了顯著抑制(P<0.05)，但是沒有高脂組表現(xiàn)的顯著；L-FABPmRNA的表達也有增高的趨勢，但與對照組相比，之間的差異還不顯著。但也在一定程度上說明高劑量的食用天然紅心鴨蛋蛋黃粉對肝臟的脂質(zhì)代謝也存在著一定的影響，而導致肝臟脂肪酸代謝紊亂。蛋黃粉引起小鼠血脂升高一方面與蛋黃中膽固醇含量高有關(guān)，另一方面由于蛋黃中脂肪酸含量較高，小鼠進