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文檔簡介
1、目的:①分離、篩選出具有較高轉酯活性的產脂肪酶酵母菌,并優(yōu)化其產酶培養(yǎng)條件。②利用全細胞催化方法,催化合成生物柴油,并分析其催化特性。 方法:⑴以橄欖油為唯一碳源進行富集培養(yǎng),以Rhodamine B為指示劑進行平板篩選,得到產脂肪酶菌株;利用滴定法、平板擴散法以及進行轉酯反應實驗,最終篩選出具有轉酯活性脂肪酶的菌株;同時初步優(yōu)化其中一株酵母菌的培養(yǎng)條件。⑵利用篩選出的酵母菌作為催化劑,以叔丁醇為溶劑,全細胞催化橄欖油與碳酸二甲
2、酯反應生產生物柴油。⑶利用酸熱法提取部分產油脂酵母的油脂,并催化其生成生物柴油。 結果:①進行了大量的產脂肪酶酵母菌的篩選工作。以橄欖油為唯一碳源,利用Rhodamine B作為指示劑進行了平板篩選實驗,從新疆石河子地區(qū)10分土樣中,篩選到了90株有脂肪酶活性的酵母菌。滴定法測量野生菌株脂肪酶活力,每1mL培養(yǎng)液脂肪酶活力:1.1-6.6U。其中B9,C1,E7,F12等有成為生物催化劑的潛力。擴增了其中脂肪酶活性較高的9株的1
3、8s rDNA,測序后BLAST并進行系統(tǒng)進化樹分析,結果表明所得菌株分別與Candida.,Rhodotorula.,Trichosporon.等屬親緣關系接近。將其中6條18s rDNA序列登錄GenBank(FJ538165-FJ538170)。②對篩選到的菌株F12液體搖瓶生產脂肪酶的條件進行了優(yōu)化。確定其最適產酶條件如下,每1L培養(yǎng)基:橄欖油+蔗糖(10:1)混合碳源20.0g,蛋白胨60.0g,K2HPO41.0g,MgSO
4、40.5g,pH7.0;培養(yǎng)溫度為30℃,搖床轉速200r/min,搖瓶裝樣量為50mL(250mL三角瓶),接種1mL,最佳培養(yǎng)時間48h。③優(yōu)化菌株F12產酶條件后,F12脂肪酶活力由最初的4.95U/mL提高到16.0U/mL增幅223%。以叔丁醇為溶劑,全細胞催化橄欖油與碳酸二甲酯反應生成了脂肪酸甲酯,即生物柴油。④在篩選到的產脂肪酶酵母中發(fā)現了若干積累油脂的菌株,提取了其中兩株酵母菌的細胞內油脂,并利用其作為原料,反應生成生物
5、柴油。實驗表明,部分菌株同時具有脂肪酶催化能力和積累油脂的能力。 結論:⑴篩選出若干具有脂肪酶活性的酵母菌,初步鑒定,所得菌株分別與Candida.,Rhodotorula.,Trichosporon.等屬親緣關系接近。其中B9,C1,E7,F12等菌株具有轉酯活性,有成為生物催化劑的潛力。⑵通過對產酶條件的優(yōu)化,使菌株F12活力增長到16.0U/mL;在以叔丁醇作為溶劑的體系中,全細胞催化橄欖油與碳酸二甲酯反應生成生物柴油。⑶
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