產脂肪酶酵母篩選及其在生物柴油制備中的應用.pdf

1、目的：①分離、篩選出具有較高轉酯活性的產脂肪酶酵母菌，并優(yōu)化其產酶培養(yǎng)條件。②利用全細胞催化方法，催化合成生物柴油，并分析其催化特性。 方法：⑴以橄欖油為唯一碳源進行富集培養(yǎng)，以Rhodamine B為指示劑進行平板篩選，得到產脂肪酶菌株；利用滴定法、平板擴散法以及進行轉酯反應實驗，最終篩選出具有轉酯活性脂肪酶的菌株；同時初步優(yōu)化其中一株酵母菌的培養(yǎng)條件。⑵利用篩選出的酵母菌作為催化劑，以叔丁醇為溶劑，全細胞催化橄欖油與碳酸二甲

2、酯反應生產生物柴油。⑶利用酸熱法提取部分產油脂酵母的油脂，并催化其生成生物柴油。 結果：①進行了大量的產脂肪酶酵母菌的篩選工作。以橄欖油為唯一碳源，利用Rhodamine B作為指示劑進行了平板篩選實驗，從新疆石河子地區(qū)10分土樣中，篩選到了90株有脂肪酶活性的酵母菌。滴定法測量野生菌株脂肪酶活力，每1mL培養(yǎng)液脂肪酶活力：1.1-6.6U。其中B9，C1，E7，F12等有成為生物催化劑的潛力。擴增了其中脂肪酶活性較高的9株的1

3、8s rDNA，測序后BLAST并進行系統(tǒng)進化樹分析，結果表明所得菌株分別與Candida.，Rhodotorula.，Trichosporon.等屬親緣關系接近。將其中6條18s rDNA序列登錄GenBank（FJ538165-FJ538170）。②對篩選到的菌株F12液體搖瓶生產脂肪酶的條件進行了優(yōu)化。確定其最適產酶條件如下，每1L培養(yǎng)基：橄欖油+蔗糖（10：1）混合碳源20.0g，蛋白胨60.0g，K2HPO41.0g，MgSO

4、40.5g，pH7.0；培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉速200r/min，搖瓶裝樣量為50mL（250mL三角瓶），接種1mL，最佳培養(yǎng)時間48h。③優(yōu)化菌株F12產酶條件后，F12脂肪酶活力由最初的4.95U/mL提高到16.0U/mL增幅223％。以叔丁醇為溶劑，全細胞催化橄欖油與碳酸二甲酯反應生成了脂肪酸甲酯，即生物柴油。④在篩選到的產脂肪酶酵母中發(fā)現了若干積累油脂的菌株，提取了其中兩株酵母菌的細胞內油脂，并利用其作為原料，反應生成生物

5、柴油。實驗表明，部分菌株同時具有脂肪酶催化能力和積累油脂的能力。 結論：⑴篩選出若干具有脂肪酶活性的酵母菌，初步鑒定，所得菌株分別與Candida.，Rhodotorula.，Trichosporon.等屬親緣關系接近。其中B9，C1，E7，F12等菌株具有轉酯活性，有成為生物催化劑的潛力。⑵通過對產酶條件的優(yōu)化，使菌株F12活力增長到16.0U/mL；在以叔丁醇作為溶劑的體系中，全細胞催化橄欖油與碳酸二甲酯反應生成生物柴油。⑶