JNK3信號通路在缺血性腦損傷中作用的研究.pdf

1、腦中風(缺血)是當今社會主要疾病之一，缺血誘導的某些關鍵酶活性的改變參與了缺血性腦損傷的形成。大量的實驗研究提示JNK激活在局灶和全腦缺血介導的神經元凋亡過程中發(fā)揮了重要的作用。因此，JNK被認為是腦缺血性疾病的治療靶點。本文采用S-D大鼠的四動脈結扎全腦缺血模型，并利用含有JIP-1和JNK相互結合的結構域的融合肽Tat-JBD和JNK小分子抑制劑SP600125闡明JNK3的激活在腦缺血再灌介導的神經元損傷中的重要作用，并著重探討了

2、JNK3介導的腦缺血性神經元凋亡的下游信號通路。 1.JNK3的激活參與了腦缺血再灌介導的神經元損傷采用四動脈結扎SD大鼠全腦缺血模型，于缺血前40分鐘或缺血后60分鐘腦室注射含有JIP-1蛋白中153-163段11個氨基酸的小肽(Tat-JBD)或于缺血前20分鐘或缺血后60分鐘腦室注射JNK小分子抑制劑SP600125，以免疫沉淀、免疫印跡方法研究蛋白間的相互結合及蛋白激酶的活性變化，以TUNEL和組織學方法觀察神經細胞的凋

3、亡和死亡情況。結果發(fā)現(xiàn)Tat-JBD通過阻斷JNK3-JIP-1復合物的形成從而抑制JNK3的激活，并在缺血前后給予都可減少腦缺血/再灌注誘導的海馬CA1區(qū)錐體神經元的凋亡細胞數(shù)，提高神經元的細胞存活數(shù)；SP600125通過抑制JNK3的激活而保護腦缺血/再灌注誘導的海馬CA1區(qū)錐體神經元的損傷?？傊陨辖Y果表明腦缺血/再灌注可以誘導JNK3的激活，并且JNK3的激活參與了腦缺血再灌介導的神經元損傷。 2.JNK3介導的腦缺血

4、性神經元凋亡的下游信號通路采用四動脈結扎SD大鼠全腦缺血模型，于缺血前40分鐘腦室注射Tat-JBD或缺血前20分鐘腦室注射SP600125，以免疫沉淀、免疫印跡以及免疫組化的方法研究蛋白間的相互結合及蛋白激酶的活性變化。結果發(fā)現(xiàn)，在海馬的CA1區(qū)，Tat-JBD和SP600125抑制腦缺血介導的JNK核底物c-Jun的磷酸化和Fasl的表達，而且SP600125抑制腦缺血介導的DP5的表達和DP5與Bcl-2的相互作用；另一方面，通過

5、抑制JNK非核底物Bcl-2的磷酸化和Bax從Bcl-2/Bax二聚體上釋放，Tat-JBD和SP600125阻止了腦缺血介導的Bax轉位于線粒體和細胞色素c從線粒體釋放到胞漿；另外，Tat-JBD還抑制腦缺血介導的Caspase3的激活。總之，以上結果表明，激活的JNK通過磷酸化其核底物c-Jun增加AP-1轉錄活性，促進了凋亡蛋白Fasl和DP5的表達，F(xiàn)asl結合其受體從而啟動Fas介導的凋亡信號通路，DP5與Bcl-2結合抑制其

6、抗凋亡活性；另一方面，激活的JNK通過磷酸化其非核底物Bcl-2，以致促進Bax從Bcl-2/Bax二聚體上釋放到線粒體外膜介導細胞色素c從線粒體釋放到胞漿，從而啟動線粒體介導的凋亡信號通路。 綜上所述，腦缺血/再灌注誘導JNK3的激活，進一步通過核通路和非核通路，最終導致海馬CA1神經元凋亡。提示JNK3的激活在腦缺血再灌介導的神經元損傷中發(fā)揮了重要作用，并可作為腦缺血性疾病的治療靶點；并且Tat-JBD和SP600125具有