海參磷脂型二十碳五烯酸對非酒精性脂肪肝的干預(yù)及作用機制研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是由肝臟脂質(zhì)代謝紊亂引起的慢性肝臟疾病,表現(xiàn)為肝臟過量脂質(zhì)堆積。隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變,不良飲食等習(xí)慣引起的NAFLD疾病發(fā)病率不斷上升,已成為全世界的重大公共衛(wèi)生問題。此外,NAFLD還是代謝綜合征的重要組成部分, NAFLD與肥胖、高血壓、糖尿病及其他心腦血管疾病密切相關(guān),對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此,針對NAFLD的預(yù)防和

2、治療已引起廣泛關(guān)注。
　　二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid, EPA)和磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine,PC)等活性物質(zhì)均對NAFLD具有緩解作用,市場產(chǎn)品較為成熟,但結(jié)合兩種活性成分優(yōu)點的磷脂型二十碳五烯酸則較為罕見,目前僅有歐美國家生產(chǎn)的南極磷蝦油,占據(jù)高端保健品市場。海參是一種我國傳統(tǒng)的滋補品和海洋藥材,海參磷脂型二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid-enr

3、iched phosphatidylcholine from sea cucumber,EPA-PC)是由海參體壁中提取的新型活性物質(zhì),是一種在Sn-2位富含EPA的PC類化合。研究證明EPA-PC具有EPA和PC的雙重活性,已有研究顯示其具有減肥、降血糖、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等功效,但對于EPA-PC對NAFLD的干預(yù)作用尚未見報道。因此,為探究EPA-PC這一新型活性物質(zhì)對NAFLD的作用效果,經(jīng)過初步篩選,本實驗以冰島刺參(Cusumar

4、ia frondosa)為原料,提取純化海參EPA-PC,采用1％乳清酸飲食誘導(dǎo)建立大鼠NAFLD模型,研究了海參EPA-PC對NAFLD脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用,并從脂肪酸、甘油三酯和膽固醇代謝三個方面對其作用機制進行了系統(tǒng)探討。主要研究結(jié)果如下:
　　1.經(jīng)EPA-PC干預(yù)3 w后,模型大鼠血清TG和TC水平顯著降低,HDLC水平顯著上升;肝臟TC和TG含量顯著下降,磷脂含量無明顯變化;血清和肝臟中多不飽和脂肪酸比例顯著上升,肝臟中

5、去不飽和指數(shù)顯著下降,n-6/n-3不飽和脂肪酸比值顯著下降;糞便總脂質(zhì)和TC含量明顯增加,膽汁酸排泄量顯著降低。提示EPA-PC可顯著降低NAFLD大鼠血清和肝臟脂質(zhì)水平,改善血清和肝臟脂肪酸組成,促進糞便脂質(zhì)的排泄。
　　2.脂肪酸代謝是肝臟中甘油三酯代謝的基礎(chǔ),本實驗從脂肪酸合成和β-氧化兩方面研究了EPA-PC改善脂肪酸代謝的分子作用機制。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,EPA-PC可顯著下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c的mRNA的

6、表達量,并進一步下調(diào)ACC1、FAS、SCD1、ME、G6PDH等與脂肪酸合成相關(guān)的下游基因轉(zhuǎn)錄;EPA-PC還可以通過顯著上調(diào)PPAR-α這一關(guān)鍵調(diào)控因子的表達,上調(diào)CPT-1、ACOX等脂肪酸分解相關(guān)基因的mRNA的表達量,促進主要脂肪酸轉(zhuǎn)運載體FAT的轉(zhuǎn)錄。酶活力檢測結(jié)果顯示,EPA-PC可顯著抑制FAS、ME和G6PDH等脂肪酸合成過程中的關(guān)鍵限速酶活力;提高CPT-1和ACOX等脂肪酸β-氧化分解的關(guān)鍵限速酶活力。以上結(jié)果表明

7、,EPA-PC通過抑制脂肪酸合成,促進脂肪酸β-氧化分解,有效改善脂肪肝大鼠的脂肪酸代謝。
　　3.甘油三酯代謝直接影響NAFLD中肝臟的脂肪蓄積水平,本實驗從甘油三酯合成和分解兩方面研究了EPA-PC改善甘油三酯代謝的分子作用機制。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,EPA-PC可顯著抑制大鼠肝臟中 GPAT、DGAT等甘油三酯合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,上調(diào)甘油三酯分解關(guān)鍵酶ATGL的mRNA表達,下調(diào)甘油二酯分解關(guān)鍵酶HSL的mRNA表達。以

8、上結(jié)果表明,EPA-PC通過抑制甘油三酯合成,促進甘油三酯分解,有效緩解脂肪肝大鼠的甘油三酯堆積。
　　4.肝臟膽固醇蓄積是NAFLD的另一主要癥狀,本實驗從膽固醇合成、轉(zhuǎn)化和分泌排泄三方面研究了EPA-PC改善膽固醇代謝的分子作用機制。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,EPA-PC可顯著抑制模型大鼠肝臟膽固醇合成關(guān)鍵酶 HMGR的轉(zhuǎn)錄,下調(diào)膽固醇轉(zhuǎn)化膽汁酸關(guān)鍵酶CYP7A的mRNA表達水平,提高膽固醇轉(zhuǎn)運排出關(guān)鍵載體SCP2的轉(zhuǎn)錄水平。

9、以上結(jié)果表明,EPA-PC主要通過抑制大鼠肝臟中內(nèi)源性膽固醇合成、促進膽固醇向膽汁中分泌排出,來降低肝臟膽固醇水平,促進膽固醇代謝平衡。
　　5. AMPK是感應(yīng)和調(diào)控體內(nèi)能量代謝的總開關(guān),對SREBP-1c、PPAR-α等脂質(zhì)代謝關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子均有調(diào)控作用,LKB1和CAMKK是AMPK的上游激酶。本實驗結(jié)果表明,EPA-PC能夠通過刺激LKB1和CAMKK的轉(zhuǎn)錄來促進AMPK的mRNA表達,提示EPA-PC可通過激活A(yù)MPK的轉(zhuǎn)

10、錄對NAFLD脂質(zhì)代謝進行綜合調(diào)節(jié)。
　　綜上所述,EPA-PC能抑制肝臟中脂肪酸、甘油三酯和膽固醇的合成,促進三者的分解和分泌排出,改善模型大鼠肝臟中的脂質(zhì)堆積癥狀。機制研究表明, EPA-PC通過促進 AMPK的 mRNA表達,來抑制 SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄,并上調(diào)PPAR-α的mRNA表達量,進一步調(diào)控脂肪酸、甘油三酯和膽固醇代謝關(guān)鍵酶的表達,進而改善大鼠肝臟脂質(zhì)代謝。本實驗研究結(jié)果為EPA-PC在功能性食品和方面的開發(fā)利用