氟蟲腈與昆蟲GABA受體相互作用的研究.pdf

1、γ-氨基丁酸(aminobutyric adic，GABA)受體是多種殺蟲劑的重要作用靶標(biāo)，而氟蟲腈（Fipronil，商品名為銳勁特）是作用于GABA受體的一種苯基吡唑類殺蟲劑，故而本文選取家蠅為研究對象，采用熒光標(biāo)記法與分子模擬法研究氟蟲腈與家蠅腦GABA受體的相作用。從實(shí)驗(yàn)和理論兩方面驗(yàn)證氟蟲腈對昆蟲的高毒性，對研制高效、綠色的殺蟲劑有重要意義。本文研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、成功制備了熒光復(fù)合物FITC-氟蟲腈，并用XP

2、S進(jìn)行表征。熒光標(biāo)記試驗(yàn)結(jié)果顯示，氟蟲腈與家蠅腦內(nèi)GABA受體有較強(qiáng)的相互作用，其最大結(jié)合量[RT]值和親和常數(shù)Kd值分別為21.3±2.5(pmol/mg protein)和109±9(nM)，從實(shí)驗(yàn)方面證明了氟蟲腈對昆蟲具有高親和性，從而導(dǎo)致了它的高毒性。
　　2、使用同源建模的方法，以煙堿型乙酰膽堿受體結(jié)構(gòu)為模板構(gòu)建了果蠅RDL受體跨膜區(qū)的三維結(jié)構(gòu)模型，然后利用得到的模型與氟蟲腈小分子進(jìn)行分子對接，并對RDL受體-氟蟲腈配體

3、復(fù)合物進(jìn)行分子動力學(xué)模擬。研究結(jié)果表明，所建模型合理，氟蟲腈與果蠅RDL受體形成的復(fù)合物很穩(wěn)定，從理論方面證明了氟蟲腈對昆蟲具有高親和性，從而導(dǎo)致了它的高毒性。
　　3、本實(shí)驗(yàn)選用1，4-丁二醇二縮水甘油醚作為活化劑，將其連接在SepharoseCL-6B，并使用氨水氨化然后將氟蟲腈衍生物固定在Sepharose CL-6B上。簡化了介質(zhì)合成的步驟，提高了產(chǎn)率，首次成功運(yùn)用氟蟲腈親和柱分離純化了家蠅腦GABA受體。
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