樺褐孔菌甾類化合物的分析及深層液態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、樺褐孔菌(Pers.：Fr.)Pil.(syn；Fuscoporia oblique(Pers.：Fr.)Aoshima)屬于真菌門、擔(dān)子菌亞門、層菌綱、非褐菌目、多孔菌科、褐臥孔菌屬，是廣泛存在于歐洲、亞洲和北美洲的一種典型的寄生在落葉樹上的白腐菌。在自然界中多以子實(shí)體存在，被稱為白樺茸。早在十六世紀(jì)，俄羅斯和西伯利亞西部民間就有用白樺茸作藥物的記載。用該菌的菌核煎出來的藥汁可用于治療癌癥和消化系統(tǒng)疾病，并且沒有發(fā)現(xiàn)毒副作用。目前美國

2、、韓國及日本正加大對(duì)該菌的研究，而我國尚處于研究的初始階段。自美國的Humfeld H等對(duì)蘑菇的深層發(fā)酵進(jìn)行了研究，并提出用發(fā)酵法來培養(yǎng)蘑菇的菌絲體后，研究者們紛紛用這種方法進(jìn)行多種菌類的發(fā)酵研究。而國內(nèi)外對(duì)樺褐孔菌的深層發(fā)酵研究甚少。對(duì)于其次級(jí)代謝產(chǎn)物甾類化合物及其測(cè)定方法更是鮮有報(bào)道。
　　 本論文通過對(duì)菌株JNPF-IO01進(jìn)行菌種鑒定，確定其為樺褐孔菌。對(duì)其深層發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，并針對(duì)其中具有生物活性的六種甾體類化合

3、物建立了相應(yīng)的分析方法，對(duì)其生物合成途徑進(jìn)行了研究，得出如下結(jié)論：
　　 (1)以本實(shí)驗(yàn)室保減的菌株JNPF-IO01為出發(fā)菌株，經(jīng)過對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的鑒定，確定其與Inonotus obliquus(AY251310)、Inonotus obliquus strain IFO8681(AY558593)和Inonotus obliquus strain MDJCBS88(DQ103883)聚類在一起，位于同一分支，具

4、有很高的同源性，說明菌株JNPF-IO01為樺褐孔菌。
　　 (2)經(jīng)試驗(yàn)建立了一種采用高效液相色譜(HPLC)分離、測(cè)定白樺脂醇、麥角甾醇、膽甾醇、羊毛甾醇、豆甾醇和谷甾醇這六種甾類化合物含量的方法。色譜條件為：以C18柱為固定相，流動(dòng)相為不同濃度梯度的H2O-CH3OH，流速1.40 mL/min，檢測(cè)波長202 nm，整個(gè)分析是在40 min內(nèi)完成的。結(jié)果表明HPLC法分析甾類化合物的結(jié)果具有很好的重復(fù)性和回收率。這個(gè)方法

5、適合用來快速、準(zhǔn)確定量測(cè)定樺褐孔菌子實(shí)體和發(fā)酵菌絲體中的甾類化合物。
　　 (3)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明搖瓶最佳發(fā)酵配方為：葡萄糖3.0％，黃豆粉0.25％，蛋白胨0.25％，KH2PO40.3％，MgSO40.08％，CaSO40.08％，初始pH4.0，接種量為15％(V/V)，培養(yǎng)溫度為28℃，裝液量為100 mL/500 mL。黃豆粉對(duì)樺褐孔菌發(fā)酵的影響比較大，此時(shí)菌絲體的生物量和甾體類化合物的產(chǎn)量分別為11.297 g/L，