冬蟲夏草及蟲草制品中活性成分檢測方法的建立及含量測定.pdf

1、蟲草(Cordyceps)是一類具有很高的藥用價(jià)值且資源稀缺的食藥用真菌,其在我國主要分布于高寒草甸地區(qū),如西藏、云南等地區(qū)。因其在抗癌、抗病毒等方面具有良好功效,被廣泛加工制成相關(guān)營養(yǎng)、滋補(bǔ)、保健品,常見的類型有制劑、片劑等。由于其生長環(huán)境條件嚴(yán)苛,且人工無法栽培天然冬蟲夏草,使得其市場售價(jià)居高不下,從而導(dǎo)致市場出現(xiàn)假冬蟲夏草或以別的物質(zhì)冒充蟲草制品,欺騙消費(fèi)者使其權(quán)益受到侵害。本研究通過考察比較4種蟲草樣品和3種蟲草制品在核苷、蟲草

2、酸、麥角甾醇等營養(yǎng)成分的含量上的差異,希望能夠?qū)窈笕娼⑾x草營養(yǎng)價(jià)值體系有所幫助,也期待為今后蟲草制品在質(zhì)量控制、規(guī)范等方面提供依據(jù)。
　　本試驗(yàn)主要研究內(nèi)容如下:
　　1、運(yùn)用高效液相色譜(HPLC)對蟲草及其制品中蟲草素和腺苷的含量進(jìn)行檢測方法研究并制定了農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。比較提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間等流動(dòng)相的不同對蟲草及其制品中蟲草素和腺苷的提取效率的影響,最終確定其提取方法為:固體試樣:稱取粉碎均勻的樣品0.5

3、g于100 mL容量瓶中,加水約80mL,置于超聲波儀中超聲提取3 h,取出后用超純水定容,搖勻。取1 mL樣液離心,將上清液過0.45μm MCM微孔濾膜,濾液供高效液相色譜法分析;液體試樣:準(zhǔn)確吸取5 g樣品于50 mL容量瓶中,加水約40 mL,置于超聲波儀中超聲提取30 min,取出用超純水定容搖勻。取樣液過0.45μm MCM微孔濾膜,濾液用高效液相色譜法在流速1 mL/min,柱溫35℃下進(jìn)行測定。該方法下腺苷和蟲草素均在1

4、-50
　　μg/mL范圍內(nèi)有良好的線性,且回收率在93.5％-99.7%之間,7家實(shí)驗(yàn)室對本方法的驗(yàn)證均結(jié)果較好,證明了此方法的可行性及可靠性。在此基礎(chǔ)上延展出對5類核苷物質(zhì)的檢測方法的確定,同時(shí)對稍有變動(dòng)的麥角甾醇測定方法進(jìn)行驗(yàn)證。
　　2、采用建立好的方法對3個(gè)產(chǎn)地冬蟲夏草和北蟲草及3種制品中5種核苷類物質(zhì)及麥角甾醇的含量進(jìn)行測定,還采用現(xiàn)有方法對樣品中蟲草酸、15種水解氨基酸和5種金屬元素的含量進(jìn)行研究。結(jié)果表明:蟲

5、草樣品中只在北蟲草中測出含有蟲草素,其含量為2.404 mg/g,其余三種冬蟲夏草中未檢出含有蟲草素,在蟲草片制品中測得含有蟲草素34.021 mg/g;北蟲草中除蟲草素外另4種核苷類成分的總含量最高,達(dá)3.96 mg/g,云南產(chǎn)冬蟲夏草的含量最低為2.24 mg/g。麥角甾醇的含量在北蟲草中含量最高,約為西藏產(chǎn)冬蟲夏草2倍、青海產(chǎn)冬蟲夏草3倍。西藏冬蟲夏草所含蟲草酸最多,達(dá)到159.886 mg/g,且4者蟲草酸含量兩兩間均差異極顯著

6、。4種蟲草樣品在氨基酸總含量上均為差異顯著,其中云南冬蟲夏草的氨基酸總量最高,為29.302 g/100g。云南和西藏冬蟲夏草中鎂(Mg)含量差異不顯著,含量為4種蟲草樣品中最高,分別為1.554mg/g和1.544 mg/g,銅(Cu)的含量在青海冬蟲夏草中最高,達(dá)到20.127 mg/kg,西藏冬蟲夏草含鐵含量最多,是
　　791.653 mg/kg,而鋅(Zn)和錳(Mn)則在云南冬蟲夏草中含量最大,分別為145.589 m

7、g/kg和64.359 mg/kg。蟲草菌絲體口服液中未測出含有肌苷、腺嘌呤、蟲草素、麥角甾醇、蟲草酸和氨基酸成分。僅在蟲草片制品中測到含有蟲草素,其含量為34.021 mg/g,麥角甾醇在膠囊制品中的含量較蟲草片的含量高,達(dá)到1.983 mg/g,且膠囊制品中氨基酸總量約為蟲草片制品氨基酸總量的2倍,達(dá)31.164 g/100g,蟲草酸在蟲草片制品中的含量比膠囊制品要高,達(dá)162.591 mg/g,在所有測定的成分中,口服液的含量均是

8、最低的。
　　3、按國標(biāo)對所有樣品中總砷(As)及鉛(Pb)、鎘(Cd)的含量進(jìn)行測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:重金屬鉛和鎘分別在西藏和云南產(chǎn)冬蟲夏草中含量最多,鉛在西藏冬蟲夏草中含量為211.395μg/kg,鎘在云南冬蟲夏草中含量為29.008μg/kg,西藏總砷含量最多為4.864 mg/kg,三種有害金屬的含量均在北蟲草中含量最低。制品中蟲草片的鉛和鎘含量比另外兩種制品的含量要高,分別為13.174μg/kg和18.838μg/kg