桑黃子實體多糖的提取、純化與體外抗氧化活性研究.pdf

1、桑黃(Phellinuslinteus)是藥用真菌的一種，是目前公認的抗癌效率較高的一種藥用大型真菌，其主要活性成分是多糖類物質(zhì)，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值。
　　 本文分別采用熱水法和超聲波協(xié)同纖維素酶法（簡稱“協(xié)同提取法”）提取桑黃子實體多糖，并用不同濃度的乙醇沉淀，得到6種粗多糖;以非穩(wěn)態(tài)擴散提取過程為基礎(chǔ)建立動力學(xué)模型;運用大孔吸附樹脂脫除粗多糖提取液中的色素;再通過DEAE-纖維素離子交換層析和SephadexG-1

2、00凝膠排阻層析，分離純化得到純化多糖;通過對DPPH自由基(DPPH·)、羥基自由基(·OH)、超氧陰離子自由基((0)2-·)的清除能力和總還原能力的測定，分別考察粗多糖和純化多糖的抗氧化活性。本文主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)協(xié)同法提取桑黃子實體多糖的優(yōu)化工藝條件為:在料液比1∶30(g/mL)，超聲頻率為45KHz，加酶量為1％等確定條件下，超聲溫度54℃、pH5.1、超聲時間39min、超聲功率240w;在此優(yōu)化條件

3、下，桑黃多糖得率可達5.30％。
　　 (2)建立的熱水提取過程和協(xié)同提取過程的動力學(xué)模型，在形式上均為:ln[(C∞)/(C∞-Ct)]=kt+ln[π2C∞/6(C∞-C0)];不同溫度下，熱水提取和協(xié)同提取的擬合方程相關(guān)系數(shù)R2均在0.86以上;熱水提取過程的活化能為14.57KJ/mol;隨著溫度或功率的升高，多糖提取的半衰期減小;熱水提取的有效擴散系數(shù)回歸方程104Ds=0.3765exp(0.0153T)，R2=0.

4、9091，協(xié)同提取的有效擴散系數(shù)回歸方程為104(Du+DE)=392.25exp(0.0013P),R2=0.9087。
　　 (3)對5種樹脂進行靜態(tài)吸附與解吸試驗，靜態(tài)試驗表明DA201樹脂對桑黃多糖提取液中的蛋白質(zhì)和色素的吸附效果最好，色素的吸附率為75.38％，蛋白質(zhì)的吸附率為63.04％;對于特定的多糖提取液，流速1.0ml/min，過DA201樹脂柱需要連續(xù)進樣10多個柱床體積(BV)才能使蛋白質(zhì)和色素達到吸附飽和

5、，總糖的吸附飽和點較早出現(xiàn)，吸附體積在4BV左右;7BV的蒸餾水可以基本將樹脂吸附的水溶性色素、蛋白質(zhì)等洗脫下來;50％的乙醇洗脫3BV時，總糖洗脫量最大，洗脫4BV時醇溶性色素洗脫量達到最大，在洗脫7BV時蛋白質(zhì)達到最大解吸量。
　　 (4)通過對DPPH自由基(DPPH·)、羥基自由基(·OH)、超氧陰離子自由基((0)2-·)的清除能力和總還原能力的測定，表明粗多糖體外抗氧化能力隨著多糖濃度的增加而增大，其中粗多糖PIPs

6、W80和PIPsC80的體外抗氧化能力最好;當濃度為lmg/ml時，PIPsW80和PIPsC80對超氧陰離子自由基的抑制能力分別為53％、57％。
　　 (5)對粗多糖PIPsW80和PIPsC80進行分離、純化，并研究純化后幾種多糖組分的體外抗氧化能力。結(jié)果表明:DEAE-纖維素離子交換層析和SephadexG-100凝膠排阻層析對桑黃多糖的分離效果明顯，可以得到單一多糖，且純化后的多糖均具有體外抗氧化活性;其中PIPsW8