ICC與炎癥細胞因子改變在PI-IBS中的作用.pdf

1、目的：
　　本實驗主要利用旋毛蟲感染C57BL\6小鼠建立PI-IBS動物模型，對該模型的內(nèi)臟敏感性和腸道動力進行評價，檢測各腸段中c-kit蛋白、IL-1β、IL-10、IL-17和IFN-γ表達，分析c-kit蛋白與炎癥因子的關(guān)系，初步探討腸道ICC與炎癥細胞因子改變在PI-IBS發(fā)病機制中的作用。
　　方法：
　　1.PI-IBS小鼠模型的建立:34只雌性C57BL/6小鼠隨機分為PI-IBS組（17只）和對照組

2、（17只），PI-IBS組用0.2 ml含400條旋毛蟲幼蟲的生理鹽水懸液灌胃感染，對照組給予等量的生理鹽水。
　　2.蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining，HE staining):感染后第14天、28天和56天小鼠的十二指腸、空腸、末端回腸和近端結(jié)腸組織做病理學(xué)檢查，觀察炎癥改變。
　　3.內(nèi)臟敏感性和腸道動力評價:對感染第56天小鼠進行結(jié)直腸擴張(colorectal distenti

3、on，CRD)，觀察小鼠的腹壁撤退反射(abdominalwithdrawal reflex，AWR)并進行評分;檢測小鼠腸道傳輸時間(intestinetransmit time，ITT)并統(tǒng)計每2小時的糞便粒數(shù)、Bristol評分、濕/干重和含水百分數(shù)。
　　4.炎癥細胞因子和c-kit蛋白表達的檢測:用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosobrent assay，ELISA）檢測不同腸段組織蛋白勻漿液

4、中IL-1β、IL-10、IL-17和IFN-γ的表達水平;用免疫組織化學(xué)染色檢測不同腸道組織中c-kit蛋白表達的部位，并對c-kit蛋白染色程度和c-kit蛋白陽性細胞比例進行綜合評分;用western blotting法對不同腸道組織的蛋白勻漿液中c-kit蛋白進行半定量分析。
　　5.炎癥因子和c-kit信使核糖核酸(message ribonucleic acid，mRNA)檢測:通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(reverse

5、 transcription polymerasechain reaction，RT-PCR)檢測各腸道組織中c-kitmRNA、IL-1βmRNA、IL-10mRNA、IL-17mRNA和IFN-γmRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.PI-IBS組小鼠的十二指腸、空腸、末端回腸和近端結(jié)腸組織在旋毛蟲感染后第14天存在顯著的炎癥細胞浸潤和間質(zhì)水腫，第14天到28天炎癥和水腫逐漸減輕，至第56天基本恢復(fù)正常。
　　2.

6、當(dāng)CRD的空氣容量為0.35ml和0.5ml時，PI-IBS組小鼠的AWR評分明顯高于對照組小鼠，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與對照組小鼠比較，PI-IBS組的ITT明顯短于對照組(P＜0.01);每2小時的糞便粒數(shù)、Bristol評分、濕重和含水百分數(shù)均高于對照組(P＜0.05)，兩組小鼠糞便干重差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.與對照組小鼠比較，PI-IBS小鼠的IFN-γ和IL-17在十二指腸和回腸組織中

7、表達升高(P＜0.05);IL-10在空腸、回腸和結(jié)腸組織中的表達均降低(P＜0.05)，c-kit在十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸組織中的表達均升高（P＜0.05），IL-1β在各腸段組織中表達的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.免疫組織化學(xué)染色提示c-kit陽性信號主要分布在腸道組織的固有層和肌肉層。PI-IBS小鼠各腸段組織染色程度和c-kit陽性細胞比例的綜合評分明顯高于對照小鼠(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.旋