自發(fā)乙型肝炎E抗原-抗體雙陽性的患者特征和形成機制.pdf

1、研究背景:
　　 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染呈世界性流行,我國屬HBV感染的地方性高流行區(qū)。與歐美國家不同的是,我國的大多數(shù)慢性乙型肝炎患者是在圍產(chǎn)期或嬰幼兒期感染,因感染時免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完善,分別有90％和25％發(fā)展成慢性感染,其HBV感染的自然史一般可分為三個期:免疫耐受期、免疫清除期和低復(fù)制期,部分專家將在低復(fù)制期發(fā)生的肝炎再活動定義為第四期,即再活動期。在免疫清除期,隨著血清丙氨酸氨

2、基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase,ALT)水平的波動,血清HBeAg合成下降,抗-HBe產(chǎn)生增加,此期的炎癥活動有可能會導(dǎo)致自發(fā)的HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換(HBeAg消失及抗-HBe出現(xiàn))。事實上,在HBV慢性感染的過程中,機體產(chǎn)生的抗-HBe抗體可以和HBeAg在很長的一段時間里(數(shù)月至數(shù)年)以免疫復(fù)合物的形式存在。
　　 目前,根據(jù)HBeAg狀態(tài)可將慢性乙型肝炎分為兩種類型:HBeAg陽性的慢性乙型肝炎和

3、HBeAg陰性的慢性乙型肝炎。HBeAg陽性的慢性乙型肝炎往往伴隨著高水平的病毒復(fù)制,而HBeAg陰性的慢性乙型肝炎通常表現(xiàn)為進展性的肝損害,血清ALT以及HBV DNA低水平波動。
　　 HBV C基因分為前C區(qū)和C區(qū),編碼的核心蛋白有兩種形式:核殼蛋白(HBcAg,為病毒核殼的結(jié)構(gòu)成分)和分泌性的HBeAg。血清HBeAg滴度受很多因素影響,其中前C/C區(qū)變異為其中的一個重要因素。前C/C區(qū)變異在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平雙重層面上

4、影響HBeAg的分泌。在轉(zhuǎn)錄水平,基本核心啟動子區(qū)(basic core promoter,BCP)T1762/A1764變異可使mRNA轉(zhuǎn)錄水平下降至野生株的1/5至1/3；在翻譯水平,前C區(qū)A1896變異使得前C第28位密碼子由TGG突變?yōu)門AG(終止密碼子),導(dǎo)致HBeAg前體翻譯提前終止。HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者中T1762/A1764及A1896變異比例較高,而HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者血清樣本中也可發(fā)現(xiàn)T1762/

5、A1764及A1896變異,其變異株/野生株比例與血清HBeAg水平相關(guān)。
　　 慢性HBV感染的血清標(biāo)志物包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe及抗-HBc。五種血清標(biāo)志物不同的組合模式代表著不同的疾病狀態(tài),在慢性乙型肝炎的臨床診斷與治療評價中發(fā)揮重要作用。臨床中,常見的血清標(biāo)志物組合模式為HBsAg、HBeAg及抗-HBc同時陽性或者HBsAg、抗-HBe及抗-HBc同時陽性。除此之外,還存在著一些少見模式,如H

6、BsAg與抗-HBs同時陽性、HBeAg及抗-HBe同時陽性等。HBeAg/抗-HBe同時陽性的慢性乙型肝炎在臨床免疫清除期患者中經(jīng)常看到,然而到目前為止,尚無針對此類HBV感染人群的系統(tǒng)性研究。
　　 研究目的:
　　 本研究目的在于調(diào)查HBeAg/抗-HBe雙陽性慢性乙型肝炎患者的流行率；分析其人口學(xué)、臨床指標(biāo)、病理學(xué)、血清學(xué)及病毒學(xué)特征；并探討血清HBeAg和抗-HBe同時陽性的可能機制。
　　 研究方法:

7、
　　 1、收集2002年1月至2009年7月在南方醫(yī)院感染內(nèi)科住院的慢性乙型肝炎患者的人口學(xué)信息、臨床和實驗室資料。納入標(biāo)準(zhǔn)為:1、住院期間診斷為慢性HBV感染,包括慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化代償期(Child-Pugh A級)或乙型肝炎肝硬化失代償期(Child-Pugh B或C級)；2、年齡≥14歲；3、入院前未進行過抗HBV治療；4、入院前12個月內(nèi)血清ALT水平間斷或持續(xù)異常。排除標(biāo)準(zhǔn)為:合并其他病毒感染(如:甲、丙

8、、丁、戊型肝炎病毒或人類免疫缺陷病毒等)；其他因為導(dǎo)致的肝炎(自身免疫性肝病、酒精性肝病、藥物性肝損害等):原發(fā)性或繼發(fā)性肝癌以及由于使用免疫抑制劑或放射治療等導(dǎo)致的HBV再激活患者。
　　 2、根據(jù)HBeAg/抗-HBe狀態(tài)(陰性或陽性)將納入患者分組,比較各組間人口學(xué)、臨床指標(biāo)、病理學(xué)、血清學(xué)特征。
　　 3、根據(jù)HBeAg或抗-HBe檢測值(S/CO,雅培i2000或AXSYM)分別將HBcAg單陽性或抗-HBe單

9、陽性慢性乙型肝炎患者各自分為低、中、高滴度三亞組,首先橫向比較分析不同HBeAg滴度或抗-HBe滴度單陽性患者亞組間的臨床特點。若低、中、高三亞組間臨床特點存在差異,則將低滴度單陽性患者與HBeAg/抗-HBe雙陽性患者進行縱向比較,分析兩組間臨床特點的差別。
　　 4、對于納入的HBeAg/抗-HBe雙陽性慢性乙型肝炎患者,從本室保存的血清庫中查找并調(diào)出患者住院時凍存的血清,并通過抽提血清HBV DNA、巢式PCR擴增及直接測

10、序檢測HBV的基因型以及基本核心啟動子區(qū)、前C區(qū)和C區(qū)變異情況。
　　 5、進行HBeAg/抗-HBe雙陽性模式的體外模擬實驗。第一步,將3對臨床血清(HBeAg單陽性血清及抗-HBe單陽性血清各一份為一對)按1:1體積比混合,37℃孵育(以下同)3小時后使用雅培i2000檢測HBeAg/抗-HBe。如檢測結(jié)果為抗-HBe陽性則減少下一次混合時抗-HBe陽性血清所加入的比例,再次混合、孵育、檢測,依次循環(huán),直到能夠檢測到HBeA

11、g及抗-HBe同時陽性。此時加入的HBeAg與抗-HBe單陽性血清的比例,即“合適比例”。根據(jù)“合適比例”適當(dāng)調(diào)整多個混合比例,混合后孵育,檢測HBeAg及抗-HBe滴度。使混合血清同時具有較高HBeAg及抗-HBe滴度的“合適比例”確定為“最適比例”。第二步,以每對血清的最適比例混合兩血清,然后使用小牛血清將混合血清稀釋至10～500倍,孵育3小時后進行HBeAg/抗-HBe檢測。第三步,以每對血清的最適比例混合兩血清,將孵育時間延長

12、至12及24小時,然后進行HBeAg/抗-HBe檢測。
　　 結(jié)論:
　　 1、在未行抗病毒治療的住院慢性乙型肝炎患者中,HBeAg/抗-HBe同時陽性患者并不罕見(占10.4％)。
　　 2、HBeAg/抗-HBe雙陽性慢性乙型肝炎為慢性HBV感染的自然史中的一個特殊階段,與更加嚴(yán)重的肝臟疾病相關(guān),此期肝臟病變累積較重。
　　 3、機體產(chǎn)生的HBeAg和抗-HBe之間的合適比例為檢測出HBeAg和抗-H