β-葡萄糖苷酶高產(chǎn)菌株選育、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶法轉化生產(chǎn)龍膽低聚糖的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase, EC3.2.1.21)屬于纖維素酶類，作為纖維素酶的一個重要組成部分，在醫(yī)療、食品、生物質(zhì)轉化中有重要的應用價值。本課題利用實驗室保藏的一株β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌(AspergillusoryzaeHML0366)，對菌種選育、發(fā)酵條件優(yōu)化和酶法轉化合成龍膽低聚糖進行了深入地研究，方案和結果如下：
　　 1．利用紫外-60Co誘變處理對米曲霉HML0366(Aspergillusory

2、zaeHML0366)菌株進行復合誘變，然后通過篩選抗葡萄糖阻遏突變株，得到一株正突變菌株ASPE0485,β-葡萄糖苷酶酶活提高到17.65U/mL，是出發(fā)菌株的2.78倍。
　　 2．采用單因素、Plackett-Burman顯著因子實驗和Box-Behnken響應面分析優(yōu)化了β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件，確定搖瓶發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基組成為(％,w/v):玉米芯3.8％、大豆蛋白胨0.5％、KH2PO40.5％、M

3、gSO4·7H2O0.05％、CaCl20.05％、吐溫-800.27％和接種量5.3％；最佳培養(yǎng)條件為：初始pH自然、種齡12h、裝量50mL/250mL、搖床轉速160r/min,培養(yǎng)溫度32℃、培養(yǎng)時間5d;在此條件下發(fā)酵，得到酶活為25.32U/mL比原始酶活17.65U/mL提高了43.5％。
　　 3．利用所獲得的β-葡萄糖苷酶粗酶液與高濃度的葡萄糖進行轉苷反應實驗，并通過TLC和HPLC的鑒定方法對酶轉苷活性及產(chǎn)物

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