納米細(xì)菌在間質(zhì)性膀胱炎發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　 間質(zhì)性膀胱炎（interstitiAlcystitis，IC)是一組以盆底部和／或會(huì)陰部間歇性疼痛伴有尿頻、尿急和儲(chǔ)尿期疼痛為臨床表現(xiàn)的癥候群，病理學(xué)主要表現(xiàn)為不明原因的膀胱壁的慢性炎癥和膀胱的慢性間質(zhì)纖維化。最近幾年來(lái)我國(guó)該病的確診率逐年上升，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)90％發(fā)生于中年婦女，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。目前IC 病因與發(fā)病機(jī)理不清，臨床診治中患者需經(jīng)歷多次膀胱鏡檢查及膀胱組織活檢，患者極其痛苦，診治費(fèi)用高，且易出

2、現(xiàn)誤診誤治，即使明確診斷，臨床上仍無(wú)有效的治療方案，該病已成為困擾國(guó)內(nèi)外泌尿外科醫(yī)師的一大難題。IC患者膀胱活檢組織及尿液標(biāo)本常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)微生物發(fā)現(xiàn)，臨床常規(guī)抗炎治療無(wú)效，但部分IC患者經(jīng)四環(huán)素類(lèi)抗生素治療后臨床不適癥狀明顯減輕，啟示我們可能有潛在的病原微生物存在。因此，對(duì)IC 進(jìn)行新的病原菌的探索研究有可能對(duì)該病的臨床診治產(chǎn)生重大意義。
　　 近年來(lái)納米細(xì)菌（nanobacteria，NB）的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的揭示為IC的

3、發(fā)生機(jī)制研究提供了新的切入點(diǎn)。研究證實(shí)，NB是一種能引起組織慢性炎癥的革蘭陰性菌，普通微生物培養(yǎng)液不適用于NB 生長(zhǎng)，必須用細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，NB在人體內(nèi)主要經(jīng)泌尿道排泄，除四環(huán)素類(lèi)藥物外對(duì)其它抗生素不敏感。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于NB與IC 發(fā)病關(guān)系的相關(guān)研究尚無(wú)報(bào)道。本項(xiàng)目在前期實(shí)驗(yàn)中已從IC患者膀胱組織中成功分離、培養(yǎng)、獲得了具有誘發(fā)組織慢性炎癥能力的NB。我們推測(cè)，NB 感染膀胱組織誘發(fā)的慢性炎癥特點(diǎn)可解釋IC的臨床病理發(fā)病過(guò)程，N

4、B 極有可能參與了IC的發(fā)生與發(fā)展。本研究擬探討NB在IC 發(fā)病中的病因作用，研究結(jié)果可望為IC的臨床診治提供新的病原學(xué)依據(jù)，為深入研究NB與IC 發(fā)病的關(guān)系打下理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1) 依據(jù)間質(zhì)性膀胱炎診斷及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，確立納入該項(xiàng)研究患者。膀胱鏡下收集間質(zhì)性膀胱炎患者的膀胱組織，采用熒光免疫組化染色和電鏡觀察檢測(cè)膀胱組織中是否存在納米細(xì)菌的可能。
　　 2) 將收集的間質(zhì)性膀胱炎患者的膀胱

5、組織及尿液標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理后進(jìn)行納米細(xì)菌的分離培養(yǎng)，并采用免疫熒光染色、電鏡觀察及16SrRNA基因擴(kuò)增及測(cè)序法對(duì)培養(yǎng)微生物進(jìn)行觀察鑒定。
　　 3) NB 檢測(cè)陽(yáng)性患者抗NB 治療：四環(huán)素（500mg）+生理鹽水（30ml）膀胱灌注，1次/周，共6次；四環(huán)素500mg，口服，1次/日，連續(xù)3個(gè)月。采用OSPI和PUF 進(jìn)行治療前后評(píng)分。
　　 4) NB 感染大鼠膀胱組織的觀測(cè)：實(shí)驗(yàn)設(shè)立正常對(duì)照組(單純手術(shù)組)、生理鹽水

6、組，NB組和NB+抗NB 治療組。采用大鼠膀胱內(nèi)注射N(xiāo)B 法制作動(dòng)物模型。觀察大鼠排尿情況及行為學(xué)變化，檢測(cè)相關(guān)炎癥指標(biāo)、肥大細(xì)胞活化情況及相關(guān)疼痛指標(biāo)，進(jìn)行膀胱組織中的NB的分布檢測(cè)和體外NB的再分離培養(yǎng)及鑒定。
　　 主要結(jié)果和結(jié)論如下：
　　 1.27例IC患者成功入選該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究，熒光免疫染色和電鏡下成功檢測(cè)到IC膀胱組中存在NB，其主要分布膀胱間質(zhì)組織中，呈簇狀分布。結(jié)果表明在部分IC患者的膀胱在組織中的確有N

7、B 存在。
　　 2．27例IC患者的膀胱組織進(jìn)行分離培養(yǎng)，結(jié)果表明48.1％患者膀胱組織中分離培養(yǎng)并鑒定出NB；而正常人中只有1例檢測(cè)出NB的類(lèi)似物。該研究結(jié)果高度提示NB與IC的發(fā)病關(guān)系密切，值得進(jìn)一步研究探討二者之間的關(guān)系。
　　 3．針對(duì)NB 陽(yáng)性患者予以抗NB 治療，能減輕IC患者臨床癥狀。
　　 4．NB 感染能引起大鼠膀胱組織慢性炎癥。四環(huán)素抗感染治療，能減輕膀胱組織的炎癥。
　　 5．NB