表面修飾金絲桃苷納米微球的心肌靶向性研究.pdf

1、目的:制備金絲桃苷聚乳酸納米微球(Polylactic acid Nanoparticle loadedHyperoside，HPN)并進(jìn)行表面靶向性修飾。對(duì)其形態(tài)、制備工藝、體外釋藥規(guī)律、大鼠體內(nèi)體外靶向性以及靶向機(jī)制進(jìn)行研究，同時(shí)，研究其在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)過程，并對(duì)其靶向性的優(yōu)劣進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　方法:1.采用乳化-高壓勻質(zhì)法，分別制備金絲桃苷聚乳酸納米球以及表面靶向性修飾納米球(PAC-Polylactic acid

2、Nanoparticle loaded Hyperoside，PAC-HPN)。掃描電鏡觀察形態(tài)特征;激光粒度儀測定其平均粒度、粒度分布及Zeta電位。
　　2.采用均勻設(shè)計(jì)法，設(shè)立綜合評(píng)分方法，研究納米球的最佳制備工藝;差示掃描量熱法檢測納米球的制備效果。
　　3.采用高效液相色譜法，建立納米球、細(xì)胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測定方法。對(duì)建立的方法進(jìn)行驗(yàn)證考察，確定其可靠性。
　　4.透析法研究納米球

3、的藥物體外釋藥規(guī)律。釋藥數(shù)據(jù)分別經(jīng)零級(jí)模型、單指數(shù)函數(shù)、雙指數(shù)函數(shù)、Weibull分布函數(shù)和Higuchi平方根函數(shù)模擬，根據(jù)AIC值和擬合度(R2)判斷評(píng)價(jià)曲線擬合優(yōu)度指標(biāo)。
　　5.采用高效液相色譜法，建立表面靶向性修飾配體的摻入率檢測方法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)。
　　6.以培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞為靶細(xì)胞，藥物的細(xì)胞蛋白攝取率為指標(biāo)，研究納米球體外靶向性;以已知的β1受體阻滯劑阿替洛爾為工具藥物，研究其體外靶向性機(jī)制

4、;以缺氧培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞為靶細(xì)胞，考察金絲桃苷聚乳酸納米球與表面靶向修飾納米球?qū)θ毖跣募〖?xì)胞保護(hù)效果的差異。
　　7.分別尾靜脈注射PAC-HPN、HPN、金絲桃苷(Hyperoside，Hyp)，考察大鼠體內(nèi)藥-時(shí)過程及各主要器官藥物分布，以峰濃度比Ce、相對(duì)攝取率Re及靶向效率te評(píng)價(jià)納米球的心肌靶向性。
　　結(jié)果:1.制備的HPN及PAC-HPN，掃描電鏡觀察形態(tài)特征為類球形，表面稍粗糙。激光散射粒度儀分析平

5、均粒徑及Zeta電位，HPN平均粒徑為（159±43.7）nm，粒徑范圍為106.2～226.5 nm。平均Zeta電位為（-12.7±0.23）mV; PAC-HPN平均粒徑為（200.7±44）nm，粒徑范圍為146.6～268.3 nm。平均Zeta電位為（4.57±0.24）mV。
　　2.均勻設(shè)計(jì)法確定的最優(yōu)條件為聚乳酸和藥物的投料比10％、油水體積比15％、勻質(zhì)次數(shù)6次、勻質(zhì)壓力15000psi。
　　差示掃描量

6、熱法結(jié)果表明，在HPN及PAC-HPN圖譜中PLA的熔點(diǎn)峰基本消失，同時(shí)Hyp的熔融峰完全消失，表明Hyp在HPN及PAC-HPN中以無定型存在或者被PLA包裹。
　　3.采用高效液相色譜法，建立了納米球、細(xì)胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測定方法。方法學(xué)考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復(fù)性等各項(xiàng)結(jié)果均符合檢測要求，方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　4.納米球體外釋藥試驗(yàn)結(jié)果表明，HPN及PAC-HPN在釋放介質(zhì)

7、中首日釋藥率分別為5.66％、4.26％;15天累積釋放率分別為56.89％、54.03％，不具有明顯的緩釋性。數(shù)據(jù)分別經(jīng)各釋放函數(shù)模擬， HPN及PAC-HPN體外釋放均符合Higuchi函數(shù)模型，其釋藥曲線分別為y=0.1678t1/2-0.039、y=0.1672t1/2-0.0548其T50分別為10.32天及11.01天。
　　5.采用高效液相色譜法，建立了表面靶向性修飾配體的摻入率檢測方法，PAC的平均摻入為5.33±

8、0.11％。摻入率并不與加入量成正比，其保持相對(duì)穩(wěn)定。方法學(xué)考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復(fù)性各項(xiàng)結(jié)果均符合檢測要求，方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　6.體外靶向性研究結(jié)果表明，HPN及PAC-HPN的藥物總攝取率分別0.141ng/μg、0.032ng/μg。其中，細(xì)胞胞吞方式攝取率分別為0.088 ng/μg、0.005 ng/μg。
　　加入β1受體阻滯劑Atenolol后，PAC-HPN的心肌細(xì)胞攝取明顯被抑制(

9、P＜0.001)，而對(duì)HPN的攝取沒有明顯變化（P＞0.05）。說明Atenolol競爭性抑制了心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN的攝取，PAC-HPN具有心肌細(xì)胞靶向作用。
　　對(duì)缺氧心肌細(xì)胞藥物攝取率試驗(yàn)結(jié)果表明，在常氧狀態(tài)下培養(yǎng)2、4、24 h，心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的3.72、4.73、4.67倍。而缺氧條件下，心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的4.32、6.27、42.5倍，增加倍數(shù)明顯高

10、于常氧狀態(tài)，說明由于缺氧使得心肌細(xì)胞表面的β1受體數(shù)量顯著增加，PAC-HPN對(duì)缺氧心肌細(xì)胞的靶向性更為突出，且隨著缺氧狀態(tài)的持續(xù)，其靶向性越來越顯著。
　　7.大鼠尾靜脈分別注射PAC-HPN、HPN、Hyp，給藥劑量按Hyp計(jì)算為12mg/kg。體內(nèi)藥-時(shí)數(shù)據(jù)經(jīng)PKSolver擬合處理，PAC-HPN、HPN、Hyp的血漿t1/2、 Tmax、Cmax、AUC分別為4.78h、1.0h、18.88μg/ml、59.66μg/m

11、l*h;3.04h、1.0h、14.15μg/ml、50.28μg/ml*h;2.07h、0.5h、28.22μg/ml、50.16μg/ml*h。
　　PAN-HPN在血漿、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟各組織中的靶向參數(shù)與HPN比較，其峰濃度比Ce分別為1.33、1.68、0.55、0.58、0.37、1.19，相對(duì)攝取率Re分別為1.19、1.69、0.63、0.53、0.29、1.02;與Hyp比較，其峰濃度比Ce分別為0.