抗人肺泡表面活性蛋白A納米抗體的制備及其靶向性檢測.pdf

1、目的：本論文以人肺表面活性蛋白A（SP-A）為靶點，制備針對人肺SP-A的納米抗體，為后期臨床帶藥提供理想的靶向配體。
　　方法：1.人肺泡表面活性蛋白A（hSP-A）的獲取及鑒定：從新鮮人肺組織中利用動物蛋白提取液提取的人肺組織總蛋白，Western blot、ELISA驗證蛋白特異性。
　　2.人肺組織SP-A特異性納米抗體(hSPA-Nb)的篩選：用固相法對噬菌體納米抗體庫進行三輪淘篩，獲得富集的三級篩選抗體庫，并采用

2、間接phage-ELISA從三級抗體庫中挑出高特異性基因序列。
　　3.特異性hSPA-Nb的表達與純化：測序分析陽性菌株并構建重組質粒PET-26b（+）/Nb4-VHH，進一步表達純化。
　　4.hSPA-Nb4的肺靶向性及安全性檢測：用Western Blot、ElISA檢測蛋白特異性，細胞熒光實驗，免疫組化及小鼠活體內成像中肺靶向性和安全性。
　　結果：本研究首次成功制備出與人肺組織hSP-A存在特異性結合的抗