葡萄籽蛋白質(zhì)的提取及分離純化研究.pdf

1、葡萄釀酒后產(chǎn)生的葡萄籽作為一種資源性副產(chǎn)物，產(chǎn)量大、易收集。由于其含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、葡萄多酚等，具有較高的研究利用價(jià)值，其中，有關(guān)葡萄籽油、葡萄籽原花青素的研究較為常見。隨著對(duì)葡萄籽利用研究的逐漸深入，葡萄籽蛋白質(zhì)的研究與利用已經(jīng)引起了人們的重視。本文從脫脂脫酚葡萄籽出發(fā)，重點(diǎn)從蛋白的提取、純化兩方面展開對(duì)葡萄籽蛋白質(zhì)的研究，并在此之后對(duì)葡萄籽蛋白的限制性水解進(jìn)行了初步研究。
　　對(duì)葡萄籽蛋白質(zhì)進(jìn)行提取分別采用鹽溶提取法、酶

2、解提取法、堿液浸提法。采用正交優(yōu)化法得出了3種蛋白提取方法的最優(yōu)工藝條件：鹽溶提取法—提取溫度63℃、鹽濃度2.2mol/L、料液比1:20、提取時(shí)間110min；酶解提取法—溫度50℃、酶加量105u/[g底物]、料液比1:28、時(shí)間120min；堿液浸提法—pH11.5、提取溫度88℃、料液比1:25、提取時(shí)間130min。對(duì)比三種蛋白提取方法，確定堿液浸提法為最佳葡萄籽蛋白質(zhì)提取方法，最佳提取條件為：物料粉碎度60目、提取溫度88

3、℃、pH11.5、料液比1:25、提取時(shí)間130min，蛋白提取率達(dá)到83.5％，提取液顏色呈淺紅色、無(wú)明顯異味。
　　結(jié)合葡萄籽蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)，設(shè)計(jì)了一套可行的葡萄籽蛋白質(zhì)純化方案，并確定了純化方案中各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的工藝參數(shù)。測(cè)定葡萄籽蛋白質(zhì)pI=3.0。確定 H2O2氧化脫色法為最佳的提取液脫色方法，脫色率達(dá)60%，蛋白損失率33%。等電點(diǎn)-鹽析沉淀法分離葡萄籽蛋白質(zhì)效果最優(yōu)，蛋白沉淀率可達(dá)到97.8%。分別采用MWCO=10k

4、Da和360Da的卷式有機(jī)膜進(jìn)行提取液濃縮和脫鹽操作。根據(jù)葡萄籽蛋白質(zhì)的pI、蛋白樣品pH穩(wěn)定范圍等因素，確定蛋白樣品離子交換層析的實(shí)驗(yàn)方法，層析過程蛋白回收率達(dá)到88.7%。純化后，分別對(duì)提取液和純化液進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析，確定葡萄籽蛋白質(zhì)分子量分布為90kDa~10kDa，其中主要存在四種蛋白，分子量分別為40kDa、37kDa、19kDa、17kDa，蛋白提取液經(jīng)分離、純化后，四種主要蛋白相對(duì)含量從63.4%提高到91.5