當(dāng)歸多糖口服液的制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其藥效學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、當(dāng)歸是一味補(bǔ)血活血傳統(tǒng)中藥，其有效成分為當(dāng)歸多糖。有研究表明，當(dāng)歸多糖對(duì)腫瘤、感染、貧血、糖尿病等具有一定的療效。采用傳統(tǒng)工藝經(jīng)提取、分離、純化的當(dāng)歸多糖由于提取產(chǎn)率低且成本高，無法大批量生產(chǎn)，不利于制成產(chǎn)品進(jìn)入臨床。本文擬采用新型澄清劑工藝提取道地藥材“岷縣當(dāng)歸”中的當(dāng)歸多糖制備當(dāng)歸多糖口服液，并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制和藥效學(xué)評(píng)價(jià)，為當(dāng)歸多糖制劑的放大生產(chǎn)和進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)奠定一定的理論及物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　傳統(tǒng)當(dāng)歸多糖提取方法包括以下幾個(gè)步

2、驟，依次為：醇浸、水提、pH調(diào)節(jié)、醇沉等步驟。所得的當(dāng)歸粗多糖糖含量為40％左右，產(chǎn)率約為2%。該法所得粗多糖制成口服液口感差，且極易出現(xiàn)沉淀。
　　本課題采用澄清劑工藝得到當(dāng)歸粗多糖，并測(cè)定其產(chǎn)率和糖含量。對(duì)口服液制備工藝進(jìn)行優(yōu)化后得到了符合藥典相關(guān)規(guī)定的當(dāng)歸多糖口服液，并制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通過建立小鼠骨髓抑制模型，以傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的當(dāng)歸多糖水提液為對(duì)照考察其藥效學(xué)。
　　第一部分當(dāng)歸多糖提取工藝的改進(jìn)
　　以甘

3、肅岷縣當(dāng)歸作為原材料，采用澄清劑工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)水體醇沉法得到當(dāng)歸粗多糖，并測(cè)定其產(chǎn)率和糖含量。對(duì)工藝中澄清劑用量、醇沉體積和水提液濃度三個(gè)影響當(dāng)歸粗多糖品質(zhì)的因素進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳的當(dāng)歸粗多糖提取工藝。
　　澄清劑工藝提取當(dāng)歸粗多糖的主要工藝流程為：醇浸、水提、加入澄清劑、濃縮、醇沉。最佳的當(dāng)歸粗多糖提取工藝為：澄清劑用量為當(dāng)歸多糖飲片重量的1%、乙醇加入量為原有溶液體積的1倍、水提液體積為10倍當(dāng)歸飲片投入量。澄清工藝所得當(dāng)歸粗多

4、糖產(chǎn)率為2.5%，糖含量大于50%。該制備方法滿足實(shí)驗(yàn)室制備當(dāng)歸多糖口服液的要求。
　　第二部分當(dāng)歸多糖口服液的制備
　　在澄清劑工藝提取當(dāng)歸粗多糖的基礎(chǔ)上，分別考察制備方法、添加劑的種類及用量和滅菌方法對(duì)當(dāng)歸多糖口服液制備的影響。當(dāng)歸多糖口服液制備方法中考察了粉末溶解和直接濃縮兩種方法；添加劑分別考察了羧甲基纖維素鈉和吐溫80及其用量；滅菌方法采用高溫高壓滅菌和巴氏滅菌對(duì)當(dāng)歸多糖口服液細(xì)菌的抑制作用進(jìn)行比較。
　　實(shí)

5、驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖口服液的最佳的制備工藝為直接濃縮、不加入添加劑并采用巴氏滅菌法滅菌。該法制備的當(dāng)歸多糖口服液符合藥典關(guān)于口服液的相關(guān)規(guī)定。
　　第三部分當(dāng)歸多糖口服液的性狀及穩(wěn)定性考察
　　對(duì)上述澄清劑制備工藝所得的當(dāng)歸多糖口服液進(jìn)行性狀和穩(wěn)定性考察。通過對(duì)口服液的密度和pH進(jìn)行測(cè)定，考察口服液的性狀。采用苯酚—硫酸法測(cè)定當(dāng)歸多糖口服液的主藥及含量。當(dāng)歸多糖口服液于-20℃、4℃、25℃、40℃、60℃放置一個(gè)月，考察其

6、穩(wěn)定性。
　　結(jié)果表明，澄清劑工藝所得的口服液pH為5.1-5.2，密度為1.1-1.2mg/mL，糖濃度大于200mg/mL，且干燥后多糖含量大于50%。當(dāng)歸多糖口服液在-20℃、4℃和25℃放置一個(gè)月無明顯性狀改變；在40℃和60℃放置一個(gè)月性狀有顯著改變。澄清劑工藝可制備出性狀穩(wěn)定的當(dāng)歸多糖口服液；當(dāng)歸多糖口服液不宜儲(chǔ)存于高溫條件。
　　第四部分當(dāng)歸多糖口服液的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
　　急性毒性實(shí)驗(yàn)中，健康小鼠灌胃當(dāng)歸多糖

7、口服液2000mg/kg(qd×7)，灌胃結(jié)束后觀察7天。小鼠死亡率為20%，當(dāng)歸多糖口服液LD50>2000mg/kg。表明當(dāng)歸多糖口服液為低毒制劑。
　　采用環(huán)磷酰胺建立骨髓抑制小鼠模型，以水提醇沉法制備的當(dāng)歸多糖水溶液為對(duì)照，對(duì)澄清劑工藝制備的當(dāng)歸多糖口服液進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)。小鼠灌胃分別給予治療藥物當(dāng)歸多糖水溶液和口服液(qd×10)，并于實(shí)驗(yàn)最后3天腹腔注射環(huán)磷酰胺(qd×3)。與陰性組相比，當(dāng)歸多糖水溶液和口服液均能夠緩解

8、骨髓抑制小鼠的體重和脾指數(shù)下降。陰性組、實(shí)驗(yàn)組和陽性組小鼠體重變化率分別為0.0302、0.2462和0.2087，脾指數(shù)分別為0.0090、0.0111和0.0093。當(dāng)歸多糖水溶液和口服液對(duì)骨髓抑制所致的白細(xì)胞下降均無明顯改善作用。值得注意的是，傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的當(dāng)歸多糖水溶液和采用澄清劑工藝制備的當(dāng)歸多糖口服液還可降低骨髓抑制小鼠外周血中的單核細(xì)胞和粒細(xì)胞，同時(shí)升高淋巴細(xì)胞百分比。與陰性組相比，實(shí)驗(yàn)組和陽性組的淋巴細(xì)胞百分比分

9、別升高了6.8%和6.2%，單核細(xì)胞計(jì)數(shù)分別降低了0.042×109/L和0.074×109/L，粒細(xì)胞計(jì)數(shù)分別降低了0.36×109/L和0.31×109/L。結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖水溶液和口服液均能促進(jìn)外周血白細(xì)胞發(fā)揮免疫作用，能在一定程度上緩解小鼠的骨髓抑制。采用澄清劑工藝制備的當(dāng)歸多糖口服液組和傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的當(dāng)歸多糖水溶液組在緩解骨髓抑制上沒有顯著性差異。
　　綜上，采用澄清劑工藝制備當(dāng)歸多糖口服液是一種高效環(huán)保的制備