利用靜電紡絲素蛋白-P(LLA-CL)納米纖維支架構建組織工程化角膜上皮的實驗研究.pdf

1、角膜緣上皮干細胞的損傷或功能紊亂會引起不同程度的角膜緣干細胞缺陷，將導致視力下降、眼睛不適、疼痛和眼表的不穩(wěn)定，甚至致盲。有研究發(fā)現用體外擴增的角膜緣上皮細胞進行移植對治愈角膜緣干細胞缺陷效果明顯。本實驗的研究目的是評估兔角膜緣上皮細胞在絲素蛋白(SF)和乳酸-己內酯共聚物(P(LLA-CL))復合納米纖維(SF/P(LLA-CL))薄膜上的黏附、增殖和分化情況，探討SF/P(LLA-CL)復合納米纖維薄膜作為組織工程角膜上皮支架材料的

2、可行性。主要研究分為三個部分:
　　 通過靜電紡絲技術制備了絲素蛋白/P(LLA-CL)共混納米纖維膜。結果顯示:通過SEM發(fā)現未處理組的絲素蛋白/P(LLA-CL)納米纖維的纖維直徑值最大，用75％乙醇蒸汽后處理的絲素蛋白/P(LLA-CL)納米纖維的纖維直徑值最小。通過接觸角分析，發(fā)現乙醇處理組的接觸角最大，水蒸氣處理組與未處理組、絲素蛋白/P(LLA-CL)納米纖維膜的接觸角相似。在目測情況下，所有處理組的絲素蛋白/P(L

3、LA-CL)納米纖維膜濕態(tài)都比干態(tài)更透明。通過酶標儀分析，發(fā)現所有處理組的絲素蛋白/P(LLA-CL)納米纖維膜濕態(tài)時的透光率都比干態(tài)時高。
　　 將原代兔角膜緣上皮細胞種植于SF/P(LLA-CL)納米纖維薄膜上進行復合培養(yǎng)。細胞黏附實驗和MTT分析發(fā)現經水蒸氣處理的SF/P(LLA-CL)納米纖維膜更能促進角膜緣上皮細胞的增殖;細胞活力檢測顯示細胞在材料上生長良好，未見明顯的死細胞，部分區(qū)域細胞呈2～層生長;免疫熒光染色表明

4、生長在材料上的兔角膜緣上皮細胞，既有成熟的角膜上皮細胞，還含有角膜上皮干細胞。HE染色發(fā)現兔角膜緣上皮細胞在材料可以連續(xù)成片生長;掃描電鏡顯示角膜緣上皮細胞在材料上保持正常上皮細胞的鋪路石樣形態(tài)，黏附生長良好，細胞表面布滿微絨毛，細胞間緊密聯接。
　　 將絲素蛋白/P(LLA-CL)納米纖維膜植入兔角膜基質內，研究材料的體內相容性。通過裂隙燈觀察和HE染色顯示絲素蛋白/P(LLA-CL)納米纖維膜在兔角膜基質內的具有良好的生物相