龍須菜非瓊膠多糖提取純化、結(jié)構(gòu)及活性初探.pdf

1、龍須菜（Gracilaria lemaneiformis）是一種重要的經(jīng)濟(jì)藻類，資源豐富，含有豐富的碳水化合物，主要用于瓊膠的生產(chǎn)。本研究基于瓊膠的常規(guī)提取工藝，制備經(jīng)堿液和未經(jīng)堿液處理的非瓊膠多糖，分別進(jìn)行分離純化;采用HPLC，HPGC，F(xiàn)TIR，NMR，高碘酸氧化及Smith降解等對(duì)多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析;采用I2-KI試驗(yàn)，剛果紅試驗(yàn)，粘度儀及掃描電鏡多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行解析;通過超氧陰離子及羥基自由基清除試驗(yàn)、過氧化氫(H2

2、O2)損傷細(xì)胞試驗(yàn)及脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)對(duì)多糖的活性進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下：
　　采用堿處理水提醇沉及水提醇沉兩種提取方式提取龍須菜非瓊膠多糖組分，經(jīng)醇沉、除蛋白、透析后得到粗多糖。其中堿處理后得到粗多糖GCP-1，得率為0.21％，硫酸基含量為0.64％，采用DEAE陰離子交換瓊脂糖凝膠分離純化，得到了兩個(gè)多糖組分，分別為GCP-1-1，GCP-1-2，回收率依次為4％，46.67％;高效凝膠滲透色譜法對(duì)純化后多糖純度及分子量

3、進(jìn)行分析，其中GCP-1-2為均一組分，分子量為1.05×104 U;粗多糖及純化后的單糖組成均主要為半乳糖，但各單糖種類和比例略有差異。具體如下所示:
　　GCP-1:Man∶Glu∶Gal=2.23∶27.85∶69.92;
　　GCP-1-2: Man∶Glu∶Gal=0∶10.56∶89.44;
　　此外，未經(jīng)堿處理的粗多糖為GCP-2，得率1.63％，硫酸基含量為1.08％，DEAE陰離子交換瓊脂糖凝膠分離純

4、化得到了兩個(gè)多糖組分，分別為GCP-2-1、GCP-2-2，回收率依次為29.82％，38.18％。高效凝膠滲透色譜法對(duì)純化后多糖純度及分子量進(jìn)行分析，其中GCP-2-1為不均一組分，分子量為3.75×106 U; GCP-2-2為不均一組分，由3.82×106 U、4.92×106 U兩個(gè)組分組成。粗多糖及純化后的單糖組成均主要為半乳糖，單糖種類和比例略有差異。具體如下所示:
　　GCP-2: Man∶Glu∶Gal=0∶0∶1

5、00;
　　GCP-2-1:Man∶Glu∶Gal=0∶4.96∶95.04;
　　GCP-2-2: Man∶\lu∶\al=0∶0∶100
　　對(duì)多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)的研究表明，GCP-1中的糖肽鍵鏈接方式為N-連接，相鄰單糖基連接方式為1→或1→6，1→2，1→4及1→3且摩爾比約為1∶1∶0.5∶3，多糖中有弱S=O吸收峰;GCP-2糖肽鍵鏈接方式為O-連接和N-連接，相鄰單糖基連接方式為1→或1→6，1→2及1→3且

6、摩爾比為1∶1∶7，有較強(qiáng)S=O吸收峰，且該多糖為由β糖苷鍵鏈接的以吡喃半乳糖為主鏈多糖，此外1H-NMR結(jié)果表明GCP-2的單糖組成α-吡喃葡萄糖，β-吡喃半乳糖，可能含有α-吡喃甘露糖。
　　對(duì)多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)的研究，GCP-1是一種有較多的分支及較長(zhǎng)的側(cè)鏈，呈現(xiàn)單股螺旋構(gòu)象，表面粗糙且水溶液為假塑性流體的多糖;GCP-2同樣是有較多的分支及較長(zhǎng)的側(cè)鏈的假塑性流體，但表面光滑，分子間作用較大，是呈現(xiàn)三股螺旋構(gòu)型的多糖。
　

7、　此外，五種多糖對(duì)自由基均有清除活性，純化多糖能力優(yōu)于粗多糖，但均弱于Vc;多糖可對(duì)雙氧水損傷細(xì)胞起保護(hù)作用，純化后多糖的最大保護(hù)率可達(dá)92.8％;多糖可促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用，但粗多糖增殖效果優(yōu)于純化后，最大增殖率為GCP-2:9.30％。
　　通過對(duì)經(jīng)堿處理和未經(jīng)堿處理的兩種非瓊膠多糖分析結(jié)果表明，非瓊膠組分仍具有一定的生物活性，堿處理通過降低其硫酸取代基含量、改變螺旋構(gòu)象、改變單糖基鏈接方式比例、改變單糖組成比例、降低分子