龍須菜多糖的降解及其降解產(chǎn)物生物活性的研究.pdf

1、龍須菜多糖具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等生物活性，是一種高活性物質(zhì)。但由于多糖的分子量較大，限制其進(jìn)入機(jī)體細(xì)胞中發(fā)揮作用，從而阻礙其活性的發(fā)揮。本文以龍須菜為研究對象，通過采用單因素法和正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，獲得龍須菜多糖的最優(yōu)提取方案，經(jīng)分離純化獲得較純多糖；通過響應(yīng)面優(yōu)化鹽酸降解龍須菜多糖過程，獲得最優(yōu)降解方案；分析研究了降解后產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)組成，以及抗氧化、降血脂等生物活性。為龍須菜多糖的合理利用提供了理論依據(jù)。
　　1)本試驗(yàn)

2、以多糖的得率為指標(biāo)，進(jìn)行固液比、時(shí)間、溫度、提取次數(shù)等單因素試驗(yàn)，通過因素顯著性分析，最終選擇固液比（w/v）、時(shí)間（h）、溫度（℃）等三個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，優(yōu)化提取工藝。得到的最佳提取工藝為固液比為1:45、溫度為95℃、時(shí)間為5h，此時(shí)龍須菜多糖的提取率為38.22％。Sevag法除蛋白以3遍為宜。
　　2）分別在不同的鹽酸濃度、時(shí)間、溫度、底物濃度等因素條件下，通過分析龍須菜多糖的降解產(chǎn)物對Fe3+的還原能力，判斷酸解的合理

3、性以及以還原糖的相對含量為考察指標(biāo)的可行性。為考察龍須菜多糖的降解效果，選取鹽酸濃度、降解時(shí)間、降解溫度、底物濃度等因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，并以還原糖的相對含量為指標(biāo)，通過進(jìn)行因素顯著性分析及結(jié)合實(shí)際操作，最后選取降解時(shí)間、降解溫度、底物濃度等因素進(jìn)行工藝的響應(yīng)面法優(yōu)化，獲得最佳的龍須菜多糖酸解工藝為底物濃度2.5%（w/v）、溫度90℃、時(shí)間90min。4個(gè)單因素中，底物濃度對指標(biāo)的影響是最顯著的（P<0.01）。
　　3）龍須菜多

4、糖降解后的產(chǎn)物經(jīng)過sephadex G-25層析柱分離純化，洗脫出3個(gè)洗脫峰，第一個(gè)洗脫峰較為明顯。故收集第一個(gè)洗脫峰的組分進(jìn)行研究，得知這個(gè)組分的低分子龍須菜多糖的相對分子質(zhì)量范圍為3100~4400 Da。其3,6-內(nèi)醚半乳糖含量為55.39±2.18%，硫酸基含量為7.53±0.60%，對比于龍須菜多糖其硫酸基含量、3,6-內(nèi)醚半乳糖的含量均降低，但并沒有去硫酸化。結(jié)合紅外光譜法以及核磁共振得知龍須菜多糖在降解前后的特征吸收峰和活

5、性基團(tuán)吸收峰都十分相似，重要官能團(tuán)沒發(fā)生明顯變化。
　　4）分別比較了龍須菜多糖降解前后對·OH的清除率和對DPPH·的清除能力，龍須菜多糖降解后對·OH的清除能力比降解前略有降低，而龍須菜多糖降解前后對應(yīng)的清除DPPH·的IC50約為4.57mg/mL和4.26mg/mL，總體說明兩者清除DPPH·的能力相當(dāng)。
　　5）采用治療性-脂代謝紊亂模型法研究低分子量龍須菜多糖對高脂小鼠模型的降血脂和抗氧化作用，研究得出：小鼠體重