亞臨界R134a萃取技術在水產(chǎn)品性激素多殘留分析中的應用研究.pdf

1、性激素屬于同化激素,由于它具有較強的蛋白質(zhì)同化作用,在上世紀曾被廣泛的應用于動物養(yǎng)殖過程中。然而,部分性激素化學性質(zhì)穩(wěn)定,不易分解,容易在動物組織中形成蓄積和殘留,人類如果長期食用含有這些性激素的動物組織,容易導致機體代謝紊亂、發(fā)育異常甚至誘發(fā)癌變。因此,歐盟自上世紀80年代開始就通過立法來限制或者禁止在動物養(yǎng)殖業(yè)中使用性激素。我國農(nóng)業(yè)部也頒布了一系列的公告,對相關性激素作了明確規(guī)定和要求。但由于利益的驅(qū)使,目前水產(chǎn)養(yǎng)殖中仍然存在濫用和

2、非法添加違禁性激素類藥物的現(xiàn)象。所以,不斷加強對水產(chǎn)品中性激素類藥物的檢測和評價對保障水產(chǎn)食品的安全仍然具有重要意義。
　　樣品前處理技術是性激素殘留分析的關鍵。簡單、快速、高效是未來樣品前處理技術的發(fā)展趨勢。而我國目前仍主要采用傳統(tǒng)的溶劑萃取,液液分配,柱層析凈化,前處理方法自動化程度低、提取凈化的效率不高,速度慢,且環(huán)境污染嚴重。因此,開發(fā)選擇性好、靈敏度高、快速高效、綠色環(huán)保的樣品前處理技術是食品安全檢測的重要內(nèi)容。本文利用

3、亞臨界R134a萃取技術作為新型、高效的樣品前處理技術,分別通過與液相色譜(HPLC)和氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)的離線聯(lián)用對水產(chǎn)品中的幾種性激素殘留進行了檢測分析,并對萃取工藝、純化方法和檢測條件進行了優(yōu)化,主要結(jié)果如下:
　　1、建立了亞臨界R134a萃取-HPLC離線聯(lián)用技術檢測水產(chǎn)品中甲基睪酮、丙酸睪酮、醋酸甲羥孕酮殘留的分析方法。首先,利用亞臨界 R134a萃取目標物,然后,目標萃取物經(jīng)過冷凍過濾去脂和C18固相萃取柱凈

4、化后,進行HPLC分析。通過單因素實驗對萃取條件進行了優(yōu)化,獲得了最佳的萃取工藝條件:萃取溫度25℃,萃取壓力4 MPa,夾帶劑甲醇用量6 mL。在最優(yōu)的萃取、純化及檢測條件下,通過空白樣品加標回收試驗來驗證方法的準確度和檢出限。結(jié)果表明,在20~100μg/kg的添加水平下,各目標物的平均回收率在75.4％~94.2%之間;RSD為5.1%~11.2%。方法的檢出限為8.4~12.5μg/kg。
　　2、建立了亞臨界R134a萃

5、取-GC-MS離線聯(lián)用技術檢測水產(chǎn)品中6種性激素殘留的分析方法。首先,利用亞臨界 R134a萃取目標物,然后,目標萃取物經(jīng)過冷凍過濾去脂,C18和NH2固相萃取柱聯(lián)用凈化后,用七氟丁酸酐衍生后進行GC-MS分析。在單因素實驗的基礎上,以己烯雌酚的為代表,通過響應曲面法對萃取工藝進行了優(yōu)化,獲得了最佳的萃取工藝條件:萃取壓力4MPa、萃取溫度26℃、夾帶劑用量4.7 mL。在最優(yōu)的萃取、純化及檢測條件下,通過空白樣品加標回收試驗來確定方法

6、的準確度和檢出限。結(jié)果表明,在1~10μg/kg的添加水平下,6種性激素的平均回收率在70.5%~103.6%之間,RSD為2.1%~12.1%,方法的檢出限為0.2~1μg/kg。
　　3、在市售實際樣品中未檢出本論文所考察的幾種性激素,本論文選擇用添加目標物的飼料來投喂錦鯉,從而制得含目標物的陽性樣品,并用來檢驗上述研究建立起來的分析方法的適用性。該方法從陽性樣品中成功檢測出己烯雌酚殘留,平均殘留量為13.8μg/kg。