斑馬魚hepcidin-2抑菌活性的研究.pdf

1、Hepcidin是一種富含半胱氨酸的多肽,其結(jié)構(gòu)與防御素很相似,因?yàn)槠淇臻g結(jié)構(gòu)中都存在四個(gè)二硫鍵。Hepcidin又被稱為L(zhǎng)EAP(liver-expressed antimicrobial peptide),既肝臟中表達(dá)的抗菌肽。Hepcidin首次發(fā)現(xiàn)是分別由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室在2000年和2001年在人類的體液中找尋抗菌肽時(shí)發(fā)現(xiàn)的。隨后又有研究發(fā)現(xiàn)hepcidin是一直以來(lái)人們?cè)趯ふ业囊环N參與遺傳性血色沉著病和慢性貧血的鐵調(diào)節(jié)激素,hep

2、cidin還參與感染和炎癥的急性應(yīng)激反應(yīng)。因此,hepcidin既是一種維持體內(nèi)鐵平衡的鐵調(diào)節(jié)激素又是一種抗菌肽。
　　目前,已經(jīng)報(bào)道斑馬魚存在兩個(gè)hepcidin基因(基因登錄號(hào)是:AY363452和AY363453)。當(dāng)斑馬魚注射細(xì)菌出現(xiàn)炎癥反應(yīng)后在腹部器官、皮膚和心臟的hepcidin基因表達(dá)量都上升。然而,hepcidin的抗菌活性及其抗菌活性與二硫鍵的關(guān)系還未有研究。
　　本文中我們克隆得到了斑馬魚Hepcidin

3、-2基因。斑馬魚Hepcidin-2的ORF有276bp,編碼92個(gè)氨基酸的前體蛋白,其中包括20個(gè)氨基酸的成熟肽。我們通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了重組 hepcidin-2成熟肽—rHCD。通過(guò)液體抑菌實(shí)驗(yàn)我們證實(shí)了斑馬魚hepcidin-2融合蛋白rHCD能抑制革蘭氏陰性菌大腸桿菌和鰻弧菌及革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng),其對(duì)4種細(xì)菌的最小抑菌濃度分別是18、15、13和9μM。通過(guò)透射電鏡,觀察到融合蛋白rHCD能直接破