酸堿金納米簇制備及其蛋白酶檢測應(yīng)用.pdf

1、熒光金屬納米簇是一類介于原子與納米顆粒之間的材料，由幾十至一百個原子組成的納米簇，其尺寸接近電子的費米波長，因此具有電子的離散能及和由尺寸決定的熒光性質(zhì)。由于熒光金屬納米簇具有超小尺寸、良好的生物相容性和熒光穩(wěn)定性，成為一類理想的熒光標(biāo)記物及生物檢測探針。本文重點開展基于蛋白包覆、穩(wěn)定與還原的金納米簇制備及其蛋白酶檢測應(yīng)用，主要研究結(jié)論如下：
　　（1）pH調(diào)控金納米簇形成：重點考察了pH、反應(yīng)時間等對納米簇尺寸與熒光性質(zhì)的影響規(guī)

2、律，并分析它們對已形成的納米簇的調(diào)控行為。實驗結(jié)果表明，將體系 pH升至11以后，熒光納米簇尺寸逐漸增大，熒光發(fā)射光譜也由藍(lán)色逐漸向紅色轉(zhuǎn)移。對于紅色熒光納米簇，當(dāng)體系的pH調(diào)節(jié)成酸性后，其熒光強度逐漸下降。該結(jié)果有助于理解金納米簇的結(jié)構(gòu)和形成機理，也可應(yīng)用于金納米簇的調(diào)控制備中。
　?。?）基于酸性熒光金納米簇的胃蛋白酶檢測：胃蛋白酶是生物體內(nèi)可在酸性條件下具有消化活性的酶，已廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中制備生物活性肽。本文設(shè)計了一種簡

3、單的、基于酶剪切活性的胃蛋白酶檢測方法，通過胃蛋白酶的剪切，使溶菌酶穩(wěn)定的金納米簇?zé)晒饨档汀Ｔ谒嵝詶l件下檢測，不僅保證了金納米簇的熒光強度，還保證了胃蛋白酶額最大活性。實驗證明，胃蛋白酶檢測的線性區(qū)間為1-100μg/mL，檢測限達(dá)到0.6 ng/mL。
　　（3）基于堿性熒光金納米簇的堿性蛋白酶檢測：堿性蛋白酶是一類在生化、食品、制藥、洗滌業(yè)等行業(yè)中應(yīng)用很廣的蛋白酶。本文設(shè)計開發(fā)了一種在堿性條件下形成并穩(wěn)定的熒光金納米簇，并利用

4、它實現(xiàn)對堿性蛋白酶的靈敏檢測。其檢測原理是堿性蛋白酶將穩(wěn)定和包覆金納米簇的溶菌酶進(jìn)行水解，造成金納米簇的熒光下降，再關(guān)聯(lián)熒光下降程度與堿性蛋白酶濃度的關(guān)系，便可實現(xiàn)對堿性蛋白酶的檢測。研究了金納米簇與堿性蛋白酶溶液體積比，反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間對檢測靈敏性的影響。結(jié)果表明：在金納米簇與堿性蛋白酶溶液體積比為1:9，反應(yīng)溫度為40℃，反應(yīng)時間為3小時的條件下，檢測效果最好。該檢測方法的線性范圍可達(dá)2-2000μg/mL（即酶活檢測范圍為4×1