乳鐵蛋白素對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖、分化和凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、牛乳鐵蛋白素(lactoferricin B，LfcinB)是一種抗菌活性非常高的微生物活性肽，且來(lái)源廣泛。在發(fā)揮抗腫瘤活性的濃度范圍內(nèi)，LfcinB對(duì)人體正常的細(xì)胞沒(méi)有影響，但是它對(duì)人類(lèi)許多腫瘤細(xì)胞系具有細(xì)胞毒作用，呈現(xiàn)出一定的針對(duì)性。本課題將人工合成的LfcinB作用于人急性T細(xì)胞白血病的T淋巴細(xì)胞(Jurkat cell)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)、蛋白質(zhì)免疫印跡分析法（Western Blottin

2、g）研究LfcinB對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響，將細(xì)胞增殖、分化和凋亡的機(jī)制系統(tǒng)地結(jié)合起來(lái)進(jìn)行分析和討論。
　　 本課題的主要研究?jī)?nèi)容包括四部分:(1)CCK-8法檢測(cè)LfcinB對(duì)Jurkat細(xì)胞增值的影響。實(shí)驗(yàn)以濃度為100 nmol/mL的雷帕霉素作為對(duì)照組，以作用濃度分別為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的LfcinB作為實(shí)驗(yàn)組，分別測(cè)定Jurkat細(xì)胞的增

3、值抑制率。結(jié)果顯示:LfcinB對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的影響效果隨著其作用濃度和時(shí)間的增加而增大，即呈現(xiàn)明顯的濃度時(shí)間依賴性;(2)利用熒光倒置顯微鏡檢測(cè)濃度分別為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的LfcinB作用Jurkat細(xì)胞24 h后的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的細(xì)胞核發(fā)生濃縮，呈濃密染色狀態(tài)，而空白組細(xì)胞的細(xì)胞核則呈均勻染色狀態(tài)，此結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞發(fā)生凋亡;(3) An

4、nexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度的LfcinB作用Jurkat細(xì)胞不同時(shí)間后，細(xì)胞發(fā)生早期凋亡的變化規(guī)律。實(shí)驗(yàn)以濃度為100 nmol/mL的雷帕霉素作為對(duì)照組，以作用濃度分別為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的LfcinB作為實(shí)驗(yàn)組，分別測(cè)定Jurkat細(xì)胞的早期凋亡率。
　　 結(jié)果顯示:在相同的LfcinB作用時(shí)間內(nèi)，Jurkat細(xì)胞的早期凋亡率隨著

5、LfcinB作用濃度的增大而增加;對(duì)于同一作用濃度的LfcinB，當(dāng)作用時(shí)間到達(dá)72 h時(shí)，其早期凋亡率有明顯的下降趨勢(shì)，而晚期凋亡或是壞死細(xì)胞的比例有所增加;(4) Western blot法檢測(cè)并分析不同濃度的LfcinB作用Jurkat細(xì)胞不同時(shí)間后，Jurkat細(xì)胞內(nèi)P21waf(1)、AKT、mTOR的磷酸化程度變化和Nocth1、C-MYC、Bcl-2、Bax、Cyclin D1的蛋白表達(dá)程度的變化，實(shí)驗(yàn)分為8組，分別為雷帕

6、霉素組(100 nmol/mL)、0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、雷帕霉素+PI3K抑制劑和LfcinB+PI3K抑制劑;結(jié)果顯示:Jurkat細(xì)胞內(nèi)的P21waf(1)、AKT、mTOR的磷酸化程度隨著LfcinB濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而降低;Nocth1、C-MYC、Bcl-2、Cyclin D1的蛋白表達(dá)程度與LfcinB的作用時(shí)間和濃度呈負(fù)相關(guān)，而B(niǎo)ax的蛋白表達(dá)程度與Lf