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1、分類號密級UDC編號碩士學位論文黃曲霉毒素M1免疫學快速檢測方法的研究學位申請人:人:蔡齊超指導(dǎo)教師:師:鄧瑞廣研究員侯玉澤教授學科專業(yè):業(yè):食品科學學位類別:別:農(nóng)學2014年4月摘要I論文題目:論文題目:黃曲霉毒素黃曲霉毒素M1免疫學快速檢測方法的研究免疫學快速檢測方法的研究專業(yè):業(yè):食品科學食品科學研究生:生:蔡齊超蔡齊超指導(dǎo)教師:指導(dǎo)教師:鄧瑞廣鄧瑞廣研究員研究員侯玉澤侯玉澤教授教授摘要現(xiàn)在,真菌毒素污染已經(jīng)成為食品中最嚴重的污
2、染之一,尤其是黃曲霉毒素污染。黃曲霉毒素包括很多種,它們都具有特別強的毒性,尤其是廣泛存在于牛奶中的黃曲霉毒素M1(AFM1),因其與人們的生活息息相關(guān),所以被人們廣泛關(guān)注。AFM1是黃曲霉毒素B1(AFB1)在動物體內(nèi)代謝產(chǎn)物,純品是無色片狀的長方形晶體,熔點為299℃,能在365nm的紫外光下發(fā)出藍紫色的熒光。誤食了含有AFM1的食物后,可能會導(dǎo)致肝臟器官發(fā)生功能性衰竭,形成肝癌或直接引起死亡。目前,對于AFM1的檢測,人們常用的有
3、三種檢測方法,就是薄層色譜法、高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。這些方法都存在較多的缺點,例如對樣品的前處理復(fù)雜、所用儀器昂貴、對操作人員要求高、靈敏度低、假性干擾結(jié)果等。而基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學檢測方法具有靈敏性好、特異性強、操作簡單和可以進行現(xiàn)場大規(guī)模檢測等優(yōu)點,所以,建立AFM1免疫學的快速檢測方法就變得尤為迫切。本實驗就旨在制備出AFM1的快速檢測試劑盒。本實驗研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下:1.AFM1人工抗原的合成與鑒定采用肟化法改造
4、AFM1,并使其分別偶聯(lián)于載體蛋白BSA和OVA上,得到免疫原AFM1BSA和包被原AFM1OVA,然后采用薄層色譜法和紫外分光光度法及SDSPAGE對肟化物和人工抗原進行鑒定,經(jīng)過動物免疫即得到鼠源多抗血清,并采用ELISA方法對其進行鑒定。結(jié)果如下:肟化改造后,肟化物在薄層板上的遷移距離變短了;偶聯(lián)物AFM1BSA在274nm處出現(xiàn)最大吸收峰,且與BSA和AFM1的紫外吸收峰都不重合;AFM1BSA的泳動速度明顯小于BSA;免疫的3
5、只小鼠效價均達到了在1104左右,其中3號小鼠所產(chǎn)生的多抗血清的敏感性最好,半數(shù)抑制濃度IC50為133.8ngmL。2.制備抗AFM1單克隆抗體并建立免疫學的定量檢測方法本次試驗是在AFM1鼠源多抗的基礎(chǔ)上,運用細胞融合技術(shù)、雜交瘤技術(shù)等成功得到了AFM1mAb,并對其親和力、敏感性和特異性等方面都進行了鑒定,得到了較好的結(jié)果。本次實驗成功篩選出兩株細胞,2C4E3和2C6F2,經(jīng)過ELISA測定,上清效價分別為1:1.28103和1
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