黃曲霉毒素M1免疫學快速檢測方法的研究.pdf

1、分類號密級UDC編號碩士學位論文黃曲霉毒素M1免疫學快速檢測方法的研究學位申請人：人：蔡齊超指導(dǎo)教師：師：鄧瑞廣研究員侯玉澤教授學科專業(yè)：業(yè)：食品科學學位類別：別：農(nóng)學2014年4月摘要I論文題目：論文題目：黃曲霉毒素黃曲霉毒素M1免疫學快速檢測方法的研究免疫學快速檢測方法的研究專業(yè)：業(yè)：食品科學食品科學研究生：生：蔡齊超蔡齊超指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師：鄧瑞廣鄧瑞廣研究員研究員侯玉澤侯玉澤教授教授摘要現(xiàn)在，真菌毒素污染已經(jīng)成為食品中最嚴重的污

2、染之一，尤其是黃曲霉毒素污染。黃曲霉毒素包括很多種，它們都具有特別強的毒性，尤其是廣泛存在于牛奶中的黃曲霉毒素M1（AFM1），因其與人們的生活息息相關(guān)，所以被人們廣泛關(guān)注。AFM1是黃曲霉毒素B1（AFB1）在動物體內(nèi)代謝產(chǎn)物，純品是無色片狀的長方形晶體，熔點為299℃，能在365nm的紫外光下發(fā)出藍紫色的熒光。誤食了含有AFM1的食物后，可能會導(dǎo)致肝臟器官發(fā)生功能性衰竭，形成肝癌或直接引起死亡。目前，對于AFM1的檢測，人們常用的有

3、三種檢測方法，就是薄層色譜法、高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。這些方法都存在較多的缺點，例如對樣品的前處理復(fù)雜、所用儀器昂貴、對操作人員要求高、靈敏度低、假性干擾結(jié)果等。而基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學檢測方法具有靈敏性好、特異性強、操作簡單和可以進行現(xiàn)場大規(guī)模檢測等優(yōu)點，所以，建立AFM1免疫學的快速檢測方法就變得尤為迫切。本實驗就旨在制備出AFM1的快速檢測試劑盒。本實驗研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下：1.AFM1人工抗原的合成與鑒定采用肟化法改造

4、AFM1，并使其分別偶聯(lián)于載體蛋白BSA和OVA上，得到免疫原AFM1BSA和包被原AFM1OVA，然后采用薄層色譜法和紫外分光光度法及SDSPAGE對肟化物和人工抗原進行鑒定，經(jīng)過動物免疫即得到鼠源多抗血清，并采用ELISA方法對其進行鑒定。結(jié)果如下：肟化改造后，肟化物在薄層板上的遷移距離變短了；偶聯(lián)物AFM1BSA在274nm處出現(xiàn)最大吸收峰，且與BSA和AFM1的紫外吸收峰都不重合；AFM1BSA的泳動速度明顯小于BSA；免疫的3

5、只小鼠效價均達到了在1104左右，其中3號小鼠所產(chǎn)生的多抗血清的敏感性最好，半數(shù)抑制濃度IC50為133.8ngmL。2.制備抗AFM1單克隆抗體并建立免疫學的定量檢測方法本次試驗是在AFM1鼠源多抗的基礎(chǔ)上，運用細胞融合技術(shù)、雜交瘤技術(shù)等成功得到了AFM1mAb，并對其親和力、敏感性和特異性等方面都進行了鑒定，得到了較好的結(jié)果。本次實驗成功篩選出兩株細胞，2C4E3和2C6F2，經(jīng)過ELISA測定，上清效價分別為1:1.28103和1