呋喃它酮和呋喃妥因酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、本論文對動物源性食品中硝基呋喃類抗生素呋喃它酮和呋喃妥因及其代謝物的酶聯(lián)免疫檢測方法進行了系統(tǒng)研究。
　　對于呋喃它酮，從其代謝物(AMOZ)出發(fā)，先將AMOZ與對醛基苯甲酸偶聯(lián)，衍生為CPAMOZ，然后利用活化酯法將其與牛血清蛋白偶聯(lián)制備免疫原，通過免疫新西蘭大耳白兔得到高特異性和高靈敏度的多克隆抗體。利用戊二醛法將AMOZ與雞卵白蛋白偶聯(lián)制備包被原。通過優(yōu)化包被抗原量、抗體稀釋倍數(shù)、封閉液、離子強度和緩沖液pH，建立了異源間接

2、競爭ELISA。該方法對NPAMOZ的IC50為0.47±0.08ng/mL，檢出限(IC15)為0.04±0.008ng/mL。利用活化酯法將CPAMOZ和辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備酶標抗原。通過優(yōu)化抗體包被量、酶標抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、離子強度、緩沖液pH，建立了同源直接競爭ELISA。該方法對NPAMOZ的IC50為0.92±0.12ng/mL，檢出限(IC15)為0.1±0.08ng/mL?？贵w具有很好的特異性，除對呋喃它酮原藥有交

3、叉反應外，與其他硝基呋喃類藥物及其代謝物的均沒有交叉。
　　選擇雞肉、雞肝、牛肉、豬肉、蝦、鯛魚、木棉魚、魷魚樣品進行添加回收實驗，樣品被分別添加了濃度為0.2ng/g、0.5ng/g、1.0ng/g、5.0ng/g的AMOZ，經(jīng)過過夜衍生后應用所建立的ELISA方法檢測，回收率在74.3％-111.5％之間，且批內(nèi)和批間的變異系數(shù)（n=3）小于20％。對添加回收結果進行方差分析，結果表明所建立的ELISA方法針對不同類別的動物組

4、織的檢測結果沒有顯著差異，方法具有很好的準確性和廣泛的應用性。
　　對于呋喃妥因從其代謝物(AHD)出發(fā)，先將AHD與對醛基苯甲酸偶聯(lián)，衍生為CPAHD，利用混合酸酐法與牛血清偶聯(lián)原制備免疫原，通過免疫新西蘭大耳白兔得到高特異性和高靈敏度的多克隆抗體。利用活化酯法將CPAHD和辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備酶標抗原，通過優(yōu)化抗體包被量、酶標抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、離子強度、緩沖液pH，建立了同源直接競爭ELISA。該方法對NPAHD的IC5

5、0為5.9±1.2ng/mL，檢出限(IC15)0.51±0.12ng/mL。抗體具有很好的特異性，除對呋喃妥因原藥有交叉反應外，與其他硝基呋喃類藥物及其代謝物的均沒有交叉。
　　選擇雞肉、牛肉、豬肉、蝦、木棉魚進行添加回收實驗，樣品被分別添加了濃度為2.0ng/g、4.0ng/g、20ng/g、100ng/g的AHD，經(jīng)過過夜衍生后應用所建立的ELISA方法檢測，回收率在71.7-104.1％之間，且批間和批內(nèi)變異系數(shù)(n=3)