枯草芽孢桿菌產(chǎn)醬香相關(guān)功能基因的篩選及初步研究.pdf

1、為了分離枯草芽孢桿菌產(chǎn)醬香相關(guān)基因，以產(chǎn)醬香的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）E20菌株（tester）與不產(chǎn)醬香的枯草芽孢桿菌10075菌株（driver）為材料，采用抑制消減雜交技術(shù)（suppression subtracted hybridization，SSH）比較它們?cè)诨蚪M上的差異，成功構(gòu)建了枯草芽孢桿菌產(chǎn)醬香的差異基因文庫(kù)。初步獲得了77個(gè)差異基因片段，對(duì)獲得的差異基因片段進(jìn)行測(cè)序及生物信息學(xué)分析。

2、>　　Blast分析顯示，有65條差異基因片段獲取了準(zhǔn)確的注釋?zhuān)骄嗨贫?8％。在65個(gè)序列中，26個(gè)是酶，這些酶中有19個(gè)酶在KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中共發(fā)現(xiàn)245個(gè)代謝產(chǎn)物。首先，在已發(fā)表的文獻(xiàn)中，提取了與45個(gè)與醬香形成相關(guān)的代謝物；其次，通過(guò)名字匹配獲取其英文名后通過(guò)HMDB和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換；最后，使用KEGG信號(hào)通路進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。對(duì)這些代謝物分別進(jìn)行富集分析，找出對(duì)應(yīng)的代謝通路。通過(guò)文庫(kù)測(cè)序基因、基因中找到的酶、酶的代謝產(chǎn)物、

3、酶參與的代謝通路、酶的代謝產(chǎn)物參與的代謝通路；已發(fā)表文章中找到的醬香相關(guān)代謝產(chǎn)物、相關(guān)代謝產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的代謝通路，相關(guān)代謝產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的酶以及一些已知的醬香相關(guān)基因等信息來(lái)構(gòu)建多層次共同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果顯示：
　　1、文庫(kù)測(cè)序基因參與的代謝途徑有苯丙氨酸代謝、氨基糖和核苷酸糖代謝、氮代謝、組氨酸代謝、淀粉和蔗糖代謝等；
　　2、文庫(kù)測(cè)序基因的代謝物主要包括大量氨基酸，糖類(lèi)，乙酸，丁酸，丙酸以及兒茶酚等小分子化合物；
　　3、文庫(kù)

4、測(cè)序基因的代謝物與乙偶姻及alsS的代謝存在一定的相關(guān)性；
　　4、文庫(kù)測(cè)序基因的代謝物為美拉德反應(yīng)提供前體物質(zhì)及反應(yīng)條件；
　　本次實(shí)驗(yàn)采用抑制性消減雜交技術(shù)成功地分離出了與產(chǎn)醬香相關(guān)的基因序列，其中某些差異基因片斷直接顯示了其在產(chǎn)香味物質(zhì)前體中的潛力，如苯丙氨酰tRNA合成酶的β鏈（pheT）、DNA旋轉(zhuǎn)酶A亞單位（gyrA）和HTH型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子yybE（yybE）等，與之相關(guān)的核酸片段是菌株能否產(chǎn)醬香的重要原因，雖然